利用腸癌特異性A33啟動子介導的溶瘤病毒拾腸癌特異的抑癌基因ST13靶向基因病毒治療結腸癌研究.pdf

1、)；j{浙江理工大學學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：我恪守學術道德，崇尚嚴謹學風。所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已明確注明和引用的內容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經發(fā)表或撰寫過的作品及成果的內容。論文為本人親自撰寫，我對所寫的內容負責，并完全意識到本聲明的法律結果由本人承擔。學位論文作者簽名：日期： 年 月 日浙江理工大學碩士學位論文利用腸癌特異性A 3 3 啟動子介導的溶瘤病毒攜帶

2、腸癌特異的抑癌基因S T l 3 靶向基因病毒治療結腸癌研究摘要結腸癌在我國的發(fā)病率有逐年上升趨勢，目前的傳統(tǒng)治療方法對不能手術切除的結腸癌效果欠佳，因此，積極探索新的結腸癌治療方法具有重要意義。癌癥的靶向基因．病毒治療策略( c a n c e r t a r g e t i n gG e n e - v i r o - t h e r a p y ) 已經成為一個研究熱點。目前，實現(xiàn)腫瘤基因．病毒的靶向性治療主要是通過腫瘤組織特異性

3、的啟動子來調控病毒載體或治療基因，從而使得重組基因．病毒對細胞的殺傷具有腫瘤選擇性。G P A 3 3 ( g l y c o p r o t e i n A 3 3 ，A 3 3 ) ，是一個4 3k D a 大小的跨膜糖蛋白，H e a t h 等在1 9 9 7 年發(fā)現(xiàn)其在9 5 ％以上的原發(fā)和轉移結腸癌中過表達，且N o r t h e r n b l o t 分析顯示2 ．8K b 大小的A 3 3 m R N A 只有在結腸

4、癌細胞系中顯示A 3 3 抗原陽性，在其他組織中幾乎沒有表達。因此將糖蛋白A 3 3 基因的啟動子應用于靶向基因．病毒治療平臺，可能具有極好的結腸癌組織特異性。在本研究中，首先通過構建A 3 3 核心啟動子和帶S V 4 0 增強子的A 3 3 核心啟動子( e A 3 3 ) 的熒光素酶報告基因載體p G L 3 ．A 3 3 和p G L 3 - e A 3 3 ，與內參照p R L ．S V 4 0 質粒共轉染至不同的細胞系中，利

5、用雙熒光素酶檢測系統(tǒng)檢測分析了A 3 3 和e A 3 3 啟動子在不同細胞系中的轉錄活性。結果顯示，A 3 3 核心啟動子在結腸癌細胞系中具有轉錄活性低但結腸癌特異性好的特點，而在其他類型癌細胞中基本沒有活性。同時發(fā)現(xiàn)，e A 3 3 在各類癌細胞中的轉錄水平與A 3 3 相比，均呈大幅度提高，有顯著性差異( P < 0 ．0 1 ) ，但S V 4 0 增強子能顯著增強A 3 3 啟動子轉錄活性的同時減低了其結腸癌特異性。因而

6、我們選擇了A 3 3 核心啟動子構建重組病毒，使用結腸癌特異性A 3 3 啟動子代替病毒E 1 A 基因的啟動子，刪除病毒E 1 B 蛋白基因，構建出結腸癌特異性增殖腺病毒載體A d ．A 3 3 ．E 1 A ．A E l B ，期望達到雙重靶向殺傷結腸癌細胞，并提高其對正常細胞的安全性的治療效果。治療基因的選擇是腫瘤的靶向基因．病毒治療取得成功的關鍵之一。為增強溶瘤腺病毒對腫瘤細胞的殺傷達到更佳效果，我們利用S T l 3 ( s