雌激素受體相關(guān)受體α、γ與雌激素受體在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的表達(dá).pdf

1、目的和意義：
　　 子宮內(nèi)膜癌作為女性生殖道最常見(jiàn)三大惡性腫瘤之一,約占女性生殖道癌瘤的20％-30％,而且近年來(lái)其發(fā)病率有上升趨勢(shì)。子宮內(nèi)膜樣腺癌占子宮內(nèi)膜癌的3/4,其發(fā)病因?yàn)橐恢笔侨藗冄芯康臒狳c(diǎn),現(xiàn)在認(rèn)為其主要因?yàn)闉槌掷m(xù)、長(zhǎng)期、異常的雌激素的刺激,和/或缺乏孕激素的拮抗。人體內(nèi)的雌激素來(lái)源廣泛,主要來(lái)源于卵巢、胎盤(pán),絕經(jīng)后婦女主要來(lái)源于腎上腺。雌激素在子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起了重要的作用。因此,研究雌激素的作用機(jī)制

2、對(duì)明確子宮內(nèi)膜樣腺癌發(fā)病機(jī)制有著重要的意義。
　　 經(jīng)典的雌激素信號(hào)傳導(dǎo)由雌激素受體(estrogen receptor,ER)與配體結(jié)合并誘導(dǎo)ER.的構(gòu)象改變開(kāi)始,ER解離熱休克蛋白(heat shock protein,HSP)形成E-ER復(fù)合物,可以直接與雌激素反應(yīng)單元序列(estrogen relative element,ERE)結(jié)合,也可間接地通過(guò)蛋白質(zhì)間相互作用與在啟動(dòng)子結(jié)合,從而增高或降低mRNA的水平和相關(guān)蛋白

3、的產(chǎn)生,進(jìn)而引起各自相應(yīng)的生理反應(yīng)。
　　 核受體超家族(nuclear receptor superfamily,NRs)是一類(lèi)成員眾多的超家族轉(zhuǎn)錄因子,其中包括經(jīng)典的配體依賴(lài)性受體和數(shù)目眾多的孤核受體。雌激素受體相關(guān)受體(estrogen receptor-related receptor,ERR)和ERs同屬于第3型核受體家族。目前,已發(fā)現(xiàn)ER有兩種亞型,即ERα和ERβ,ERRs有三種亞型,即ERRα、ERRβ和ERRγ

4、。ERα早在上世紀(jì)八十年代即被發(fā)現(xiàn),并被認(rèn)為是唯一的ER,直至十年后ERβ才被發(fā)現(xiàn)。ERRα、ERRβ最初是利用ERα受體的DBD區(qū)作為探針采用低嚴(yán)謹(jǐn)雜交技術(shù)從腎cDNA文庫(kù)中篩選出來(lái),而ERRγ則于1999年利用GRIP1蛋白為誘餌通過(guò)酵母菌雙雜交技術(shù)篩選得到。ERRs和ERs分享了NRs家族的結(jié)構(gòu)特征,并且二者氨基酸序列和基因序列具有很高的同源性。其基因結(jié)構(gòu)主要為含有5個(gè)功能區(qū)的結(jié)構(gòu)域,其中研究比較多的是A/B、C、E區(qū):A/B區(qū)含

5、有配體結(jié)合區(qū)1(ligand-dependent activation function 1,AF-1),其特異性較低,可以結(jié)合不同的因子以激活靶基因；C區(qū)被稱(chēng)為DNA結(jié)合區(qū)(DNA-binding domain,DBD),ERα和ERβ在此區(qū)的同源性高達(dá)95％,ERRα與ERα此區(qū)同源性為66％,ERRγ的DBD與ERRα相比有93％一致；E區(qū)含有一個(gè)被稱(chēng)為激素結(jié)合區(qū)(ligand-binding domain,LBD)的結(jié)構(gòu)域和一個(gè)

6、配體結(jié)合區(qū)2(ligand-dependent activation function2,AF-2),ERα和ERβ在LBD的同源性達(dá)55％,ERRα與ERα此區(qū)同源性為33％。
　　 雌激素信號(hào)傳導(dǎo)中,ERs反應(yīng)元件ERE和ERRs的反應(yīng)元件(ERR responsiveelement,ERRE)也具有較高的同源性。ERE是5’-TGACCTnnnAGGTCA-3’反向回文序列(n為任一核苷酸),其核心為5’-AGGTCA-3

7、’序列。ERR單體識(shí)別的是則ERRE,該元件是具有相同核心并向5’端延伸3個(gè)核苷酸的序列,即5’-TnA-AGGTCA-3’。因此,ERs和ERRs均可識(shí)別以5’-AGGTCA-3’序列為核心的激素反應(yīng)元件,且ERRs在體內(nèi)未發(fā)現(xiàn)相應(yīng)的天然配體,因此ERRs和ERs對(duì)ERE的轉(zhuǎn)錄活性具有相似性、競(jìng)爭(zhēng)性。含有此核心序列的HRE結(jié)構(gòu)變異體在人體內(nèi)廣泛存在,比如:完整或不完整的ERE元件、ERRE元件、回文性的甲狀腺素反應(yīng)元件(thyroid

8、 response element,TRE)以及甾體生成因子-1(SF-1因子)的反應(yīng)元件(steroid factor-1 responsive element,SFRE)。這些都成為ERRs和ERs廣泛參與代謝并產(chǎn)生交互作用的基礎(chǔ)。因而兩個(gè)家族可能在子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)生、發(fā)展方面也發(fā)揮了重要作用。
　　 有研究表明ERα和ERβ可以形成ERα同源二聚體、ERβ同源二聚體或ERα/ERβ異源二聚體與ERE結(jié)合,以不同的活性參與

9、調(diào)控不同配體的生物學(xué)效應(yīng)。ERRα也可以形成單體、同源二聚體識(shí)別ERRE產(chǎn)生雌激素效應(yīng)或與ERα形成異源性二聚體干擾ER的基因調(diào)控。而ERRα的作用及活性在某種程度上又取決于ERα對(duì)ERE的結(jié)合程度。ERRγ也是ERRα在表達(dá)過(guò)程中密切聯(lián)系的家族成員,有研究表明ERRγ有調(diào)節(jié)ERRα表達(dá)水平的作用。而小鼠實(shí)驗(yàn)表明ERRα減少會(huì)引起ERRγ上調(diào)。因此,研究ERRα、ERRγ、ERα和ERβ在子宮內(nèi)膜組織表達(dá)對(duì)明確子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)生發(fā)展有

10、著重要的意義。
　　 Ariazi等用real-time PCR的方法測(cè)量了ERRs和ERs在乳腺癌組織中的mRNA的表達(dá),并評(píng)價(jià)了ERRα、ERRγ作為乳腺癌腫瘤標(biāo)記物的作用和及其在癌癥患者預(yù)后評(píng)估中的作用。Kraus等曾對(duì)ERα(+)的乳腺癌細(xì)胞和ERα(-)的宮頸癌細(xì)胞中的ERRα進(jìn)行分析,他發(fā)現(xiàn)ERR-α與ERα的表達(dá)關(guān)系密切。孫蓬明等用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法測(cè)量了ERRs和ERs在卵巢癌組織中的mRNA的陽(yáng)性表達(dá)率,也

11、認(rèn)為ERRs與ERs在卵巢組織中的相互作用可能是卵巢癌復(fù)雜的腫瘤內(nèi)分泌生物學(xué)行為的分子基礎(chǔ)。鑒于既往研究的結(jié)果,我們認(rèn)為作為雌激素依賴(lài)性腫瘤的子宮內(nèi)膜樣腺癌,其發(fā)生發(fā)展的過(guò)程有可能與兩個(gè)家族相互作用的分子機(jī)制有關(guān)。目前,國(guó)內(nèi)外的對(duì)ERR的研究主要停留在乳腺癌、卵巢癌上,對(duì)子宮內(nèi)膜癌的研究也主要停留在細(xì)胞學(xué)上,采用的方法也多是采用普通PCR或免疫組化所做的定性研究。而對(duì)屬于雌激素依賴(lài)性子宮內(nèi)膜癌的子宮內(nèi)膜樣腺癌的報(bào)道也頗為罕見(jiàn)。因此,本研

12、究擬對(duì)ERs和ERRs兩個(gè)核受體家族在子宮內(nèi)膜樣腺癌發(fā)病過(guò)程中的量的變化及相關(guān)關(guān)系進(jìn)行探討。
　　 本研究采集子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè),并納入癌旁組織與癌組織、正常組織比較。結(jié)合考慮腫瘤的生物學(xué)行為,及癌旁組織的病理類(lèi)型,我們用癌旁組織評(píng)價(jià)正常內(nèi)膜發(fā)展到癌之間的癌前病變。采用Taqman熒光定量PCR的方法檢測(cè)ERRα、ERRγ、ERα和ERβ在子宮內(nèi)膜的癌變過(guò)程中mRNA的表達(dá)量的變化,并結(jié)合子宮內(nèi)膜樣腺癌患者的臨床病理資料進(jìn)

13、行綜合分析,探討ERRs和ERs在子宮內(nèi)膜的癌變過(guò)程中表達(dá)的相關(guān)性及其臨床意義,以期為揭示子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)生機(jī)制提供新的思路與靶點(diǎn)。
　　 方法與內(nèi)容：
　　 1.研究對(duì)象
　　 本研究共收集44例子宮內(nèi)膜樣腺癌組織、30例正常組織及30例癌旁組織,所有標(biāo)本均經(jīng)病理切片HE染色明確診斷后納入,手術(shù)病理分期按2000年國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期,所有患者術(shù)前均未接受放、化療及激素治療。
　　

14、 2.研究方法
　　 采用TRIzol一步法提取所有組織總RNA,檢測(cè)所有組織總RNA的質(zhì)量和完整性,再將總RNA逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)成cDNA,采用熒光實(shí)時(shí)定量PCR的Taqman探針?lè)y(cè)量所有組織標(biāo)本中ERα、ERβ、ERRα及ERRγmRNA的表達(dá)水平,用標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的相對(duì)定量法計(jì)算目標(biāo)基因表達(dá)量。
　　 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
　　 采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。ERα、ERβ、ERRα、ERRγmRNA表達(dá)水平差異

15、及ERα/ERβ、ERα/ERRα、ERRα/ERRγ比值的變化三組比較采用非參數(shù)法Kruskal-Wallis H檢驗(yàn),進(jìn)一步做兩兩比較采用Nemenyi法。采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析癌組織中ERα、ERβ、ERRα、ERR-γ四項(xiàng)指標(biāo)與分期、分級(jí)的關(guān)系。P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：
　　 1.ERα、ERβ、ERRα及ERRγ四項(xiàng)指標(biāo)在癌旁組織中的表達(dá)均明顯高于正常組織和癌組織,即癌前組織中ERs