苦瓜提取物通過抑制NF-κB的信號通路降低炎癥反應(yīng).pdf

1、目的:探討苦瓜提取物(BME)在脂多糖(LPS)誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞系RAW264.7中的抗炎作用，并且揭示BME在抑制巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)中的機(jī)制。
　　方法:培養(yǎng)鼠源的巨噬細(xì)胞系RAW264.7，檢測不同濃度BME對該細(xì)胞的毒性作用，選最適濃度的BME預(yù)處理，再用LPS刺激實(shí)驗(yàn)細(xì)胞，用Real-time PCR和Western blot法檢測TNF-α、COX-2和iNOS的mRNA和蛋白表達(dá)的影響。用ELISA法檢測細(xì)胞分泌液中TNF-

2、α和PGE2，用Griess reaction法檢測NO的產(chǎn)生。BME抑制TNF-α、PGE2和iNOS產(chǎn)生的機(jī)制用Western blot法檢測核因子-κB（nuclear factor-kappa B，NF-κB）p65的磷酸化情況。用脂質(zhì)體2000將NF-κBp65 siRNA和對照siRNA轉(zhuǎn)染巨噬細(xì)胞系RAW264.7，Western blot法檢測p65的表達(dá)及Real-time PCR法檢測TNF-α、COX-2和iNOS

3、的表達(dá)，同時用NF-κBp65的抑制劑做同樣檢測。
　　結(jié)果:BME明顯抑制LPS刺激的巨噬細(xì)胞系RAW264.7產(chǎn)生的TNF-α、PGE2和NO，p＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。通過抑制NF-κBp65通路BME抑制TNF-α、COX-2和iNOS的產(chǎn)生，使用NF-κ Bp65 siRNA和抑制劑后可以降低LPS刺激的TNF-α、COX-2和iNOS的產(chǎn)生。結(jié)論:BME有在RAW264.7中抑制LPS誘導(dǎo)的炎癥相關(guān)因子產(chǎn)生的作用，并