p,p’-DDT對(duì)大腸癌細(xì)胞DLD1增殖和粘附的影響及機(jī)制研究.pdf

1、p, p’-DDT,又稱二氯二苯三氯乙烷,是首個(gè)被廣泛使用的有機(jī)氯農(nóng)藥。DDT在上世紀(jì)曾經(jīng)被大量用于農(nóng)業(yè)和治療瘧疾傷寒等傳染病。后來人們發(fā)現(xiàn)其具有持久性和環(huán)境毒性,因此各國(guó)逐漸禁止生產(chǎn)和使用DD T。DD T作為一種持久性有機(jī)污染物,能通過直接接觸和食物鏈暴露于人體,對(duì)人類健康產(chǎn)生危害。大腸癌作為常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì)。大腸癌的發(fā)生發(fā)展被認(rèn)為是遺傳、環(huán)境、飲食和生活方式等多種因素共同作用的結(jié)果。近年來流行病學(xué)調(diào)查

2、發(fā)現(xiàn), D DT與大腸癌的發(fā)展有相關(guān)性,但兩者間的具體作用機(jī)制并不清楚。本研究主要探討 p, p’-DDT對(duì)大腸癌發(fā)展的影響及其作用機(jī)制。研究?jī)?nèi)容包括以下幾個(gè)部分:
　　第一部分:在體外,通過MTT實(shí)驗(yàn),檢測(cè)p, p’-DDT對(duì)大腸癌細(xì)胞DLD1細(xì)胞存活的影響;Western印跡及 RNA干擾技術(shù)檢測(cè) p, p’-DDT對(duì)細(xì)胞增殖相關(guān)的Wnt/β-catenin信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白及其下游靶基因的影響;通過檢測(cè)ROS水平及SOD活性確

3、定 p, p’-DDT對(duì) DLD1細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激水平的影響。結(jié)果表明,在體外,p, p’-DDT通過氧化應(yīng)激介導(dǎo)Wnt/β-catenin信號(hào)通路激活和下游靶基因c-Myc和cyclin D1過表達(dá)從而促進(jìn)大腸癌D L D1細(xì)胞增殖。
　　第二部分:在體內(nèi),通過裸鼠成瘤模型檢測(cè)p, p’-DDT對(duì)裸鼠大腸癌腫瘤生長(zhǎng)的影響;免疫組化及 western印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)腫瘤組織內(nèi) Wnt/β-catenin信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白和Ki-67表達(dá)變

4、化;通過檢測(cè)SOD活性和GSH含量確定腫瘤組織內(nèi)氧化應(yīng)激水平的變化。結(jié)果表明,在體內(nèi),p, p’-DDT也通過氧化應(yīng)激水平介導(dǎo)Wnt/β-catenin信號(hào)通路激活從而促進(jìn)大腸癌腫瘤的生長(zhǎng)。
　　第三部分:通過細(xì)胞聚集實(shí)驗(yàn)和結(jié)晶紫染色實(shí)驗(yàn)檢測(cè) p, p’-DDT對(duì)大腸癌細(xì)胞DLD1細(xì)胞與細(xì)胞間和細(xì)胞與基質(zhì)間粘附的影響;熒光定量PCR和 western印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)相關(guān)粘附因子E-cadherin和CD29的表達(dá)變化。結(jié)果表明,p,