糖皮質(zhì)激素誘導人卵巢癌細胞骨架重構(gòu)和抑制細胞遷移的作用及其機制研究.pdf

1、腫瘤細胞的增殖、黏附、遷移及侵襲能力受體內(nèi)神經(jīng)內(nèi)分泌的影響，并與腫瘤的發(fā)生進展密切相關。卵巢癌是女性生殖器官常見的腫瘤之一，由于卵巢上皮細胞的生物學特性及卵巢癌的病理類型均很復雜，因此卵巢癌的發(fā)生發(fā)展機制至今還不很清楚。已知在卵巢癌中糖皮質(zhì)激素受體(glucocorticoidreceptor，GR)的陽性率高達88％以上，比雌激素受體和孕激素受體的陽性率(50％)還高，在卵巢癌細胞系中也檢測到GR的存在，提示糖皮質(zhì)激素(glucoco

2、rticoids，GCs)在卵巢上皮的功能調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用，并有可能參與卵巢癌的發(fā)生和發(fā)展過程。已有研究提示，慢性應激能影響腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，因此作為體內(nèi)主要的應激激素，闡明GCs對腫瘤細胞生物學行為的影響具有重要的理論和臨床意義。
　　 但是迄今為止，關于糖皮質(zhì)激素對卵巢癌細胞生物學特性的影響了解的仍不多，糖皮質(zhì)激素在卵巢癌細胞遷移或侵襲過程中的作用至今未見研究報道。我們前期的工作發(fā)現(xiàn)人工合成的糖皮質(zhì)激素--Dex能夠抑制卵

3、巢癌細胞的增殖、誘導卵巢癌細胞發(fā)生形態(tài)改變，并促進細胞與細胞外基質(zhì)(extracellularmatrix，ECM)的黏附。在此基礎上，我們進一步研究了Dex對細胞骨架和細胞遷移的影響及其可能的機制。
　　 我們用羅丹明-鬼筆環(huán)肽(rhodamine-phalloidin)對細胞骨架肌動蛋白(F-actin)染色，觀察了100nMDex處理HO-8910細胞前后肌動蛋白骨架的變化，發(fā)現(xiàn)對照細胞肌動蛋白骨架主要分布于膜周，而100

4、nMDex處理細胞后可導致細胞骨架肌動蛋白的重構(gòu)并誘導應力纖維的形成。我們又進一步觀察了Dex對卵巢癌細胞遷移能力的影響。細胞劃痕實驗(scratchassay)的結(jié)果表明，Dex處理卵巢癌細胞HO-8910和SKOV3后兩種細胞的劃痕愈合速度較對照均減慢。用Transwell實驗(cellmigrationassay)的方法發(fā)現(xiàn)Dex處理后HO-8910細胞和SKOV3細胞的遷移能力明顯被抑制，發(fā)生遷移的細胞數(shù)量分別為對照的55％和5

5、7％(10<0.05)，表明Dex可明顯抑制卵巢癌細胞的遷移能力。
　　 我們進一步從Dex調(diào)節(jié)的靶基因和相關信號轉(zhuǎn)導通路入手，探討了Dex誘導人卵巢癌細胞HO-8910細胞骨架重構(gòu)和抑制細胞遷移的可能機制，獲得了如下結(jié)果：
　　 (1)Dex能夠上調(diào)磷酸化Akt水平，增加PI-3K/Akt通路的活性。用PI-3K/Akt
　　 通路的特異性抑制劑Wortmannin可以阻斷Dex誘導的應力纖維形成，但對Dex抑

6、制細胞遷移的作用沒有明顯影響，表明Dex激活AKt參與了Dex誘導的HO-8910細胞應力纖維的形成，但在Dex抑制細胞遷移過程中沒有明顯作用。
　　 (2)Rho相關蛋白激酶(Rho-associatedcoiled-coilformingkinase，ROCK)是Rho下游的激酶，包含兩種亞型ROCK1和ROCK2。ROCK參與細胞骨架的變化、細胞運動細胞的存活和死亡等過程。本研究發(fā)現(xiàn)Dex能夠上調(diào)ROCK2的蛋白水平，并促

7、進其磷酸化進而使其活化，但是不影響ROCK1mRNA的表達。單獨使用ROCK1/2的抑制劑Y-27632對HO-8910細胞骨架肌動蛋白沒有明顯影響，但能明顯抑制細胞的遷移；Y-27632聯(lián)合Dex則能夠完全阻斷Dex誘導細胞應力纖維形成的作用，但不能逆轉(zhuǎn)Dex抑制細胞遷移的作用。表明Dex上調(diào)ROCK2的表達和活性介導了Dex對HO-8910細胞骨架肌動蛋白重構(gòu)的作用，但不參與Dex抑制卵巢癌細胞遷移的作用。
　　 (3)我們

8、還發(fā)現(xiàn)Dex能快速激活p38，用p38MAPK特異性抑制劑SB203580抑制p38活性能誘導細胞骨架肌動蛋白的重構(gòu)和應力纖維形成，但是抑制劑聯(lián)合Dex處理細胞時并不影響Dex誘導細胞骨架肌動蛋白重構(gòu)和應力纖維形成的作用，表明p38MAPK通路誘導細胞骨架重構(gòu)和Dex對細胞骨架重構(gòu)的作用通過不同的機制。
　　 (4)Dex能夠在HO-8910細胞中上調(diào)小G蛋白RhoB的表達，用siRNA技術(shù)抑制RhoB表達不影響Dex誘導細胞骨

9、架重構(gòu)的作用，但是能部分逆轉(zhuǎn)Dex對細胞遷移的抑制作用，表明RhoB參與了Dex對HO-8910細胞的遷移抑制作用，但不參與Dex誘導細胞骨架重構(gòu)的作用。
　　 以上結(jié)果還提示：Dex誘導細胞骨架重構(gòu)和抑制細胞遷移是兩個相對獨立的過程，可能通過不同的分子和信號通路調(diào)控。
　　 綜上述，我們在人卵巢癌細胞HO-8910中證實Dex可以誘導細胞骨架肌動蛋白重構(gòu)和應力纖維形成，并發(fā)現(xiàn)Dex能夠明顯抑制卵巢癌細胞的遷移。進一步的

10、機制研究發(fā)現(xiàn)Dex在HO-8910中可以激活PI-3K/Akt通路，上調(diào)ROCK2的表達并增加其活性，這些作用與Dex誘導細胞骨架重構(gòu)密切相關，但是與Dex抑制遷移的作用無明顯關系。抑制p38MAPK也可誘導細胞應力纖維的形成。實驗還發(fā)現(xiàn)Dex在HO-8910細胞中能上調(diào)RhoB的表達，該作用參與了Dex抑制細胞遷移的作用，但與Dex誘導應力纖維的形成無明顯關系。以上結(jié)果進一步闡明了Dex對細胞骨架調(diào)節(jié)和遷移調(diào)節(jié)的機制，有助于更深入了解