大豆異黃酮對(duì)大鼠腦缺血再灌后神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響及機(jī)理探討.pdf

1、目的：1.觀察大豆異黃酮（soybean isoflavone,SI）對(duì)大鼠全腦缺血再灌注損傷后神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響。2.探討SI對(duì)腦缺血再灌注損傷保護(hù)作用的機(jī)制。
　　方法：成年Sprague-Dawley大鼠60只，雄，隨機(jī)分為3組：假手術(shù)組（Sham group），缺血再灌組(IR group)，大豆異黃酮預(yù)處理組（SI group），每組20只。大豆異黃酮預(yù)處理組給予SI120 mg/kg連續(xù)灌胃三周，其他兩組用等體積的0.

2、9％生理鹽水連續(xù)灌胃三周，第22天進(jìn)行手術(shù)。阻斷三血管建立全腦缺血再灌注損傷模型，假手術(shù)組不予缺血；另外兩組缺血1 h后再灌1 h，缺血再灌注過程中動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)腦電圖變化。光鏡下觀察各組腦皮層及海馬組織形態(tài)的病理變化,透射電鏡觀察各組海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變。流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定神經(jīng)細(xì)胞凋亡率。生化檢測(cè)皮層腦組織Ca2+-Mg2+-ATP酶及Na+-K+-ATP酶的活性。用RT-PCR法檢測(cè)皮層腦組織中bcl-2 mRNA、bax mR

3、NA表達(dá)。免疫組織化學(xué)法測(cè)定腦組織中Caspase-3的表達(dá)。
　　結(jié)果：1、光鏡下病理學(xué)改變：Sham組腦組織神經(jīng)細(xì)胞數(shù)目基本正常，形態(tài)正常，胞體飽滿，胞漿淡染，核仁明顯。IR組腦組織損傷嚴(yán)重，腦組織正常結(jié)構(gòu)消失，神經(jīng)細(xì)胞及膠質(zhì)細(xì)胞均腫脹，變性壞死，胞膜不清，胞核固縮，間質(zhì)水腫明顯，細(xì)胞及血管周圍間隙增大。SI組病變輕微，多數(shù)細(xì)胞保存完好，神經(jīng)細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞僅有輕微水腫，核仁清晰可見，胞膜完整。2、透射電鏡下病理學(xué)改變：Sham

4、組神經(jīng)細(xì)胞雙層核膜清楚完整，染色質(zhì)分布均勻，線粒體嵴清晰可見，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)無擴(kuò)張。IR組神經(jīng)細(xì)胞水腫，細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)邊集、分布不均，雙層結(jié)構(gòu)的核膜破壞，線粒體嵴消失、腫脹、空泡化，結(jié)構(gòu)破壞，不完整，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張明顯，核糖體數(shù)量明顯減少。SI組細(xì)胞輕度水腫，結(jié)構(gòu)完整，少數(shù)線粒體腫脹，嵴突少許破壞，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)無明顯擴(kuò)張。3、流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定凋亡率：各組均收集10000個(gè)細(xì)胞，IR組細(xì)胞凋亡率明顯高于Sham組；SI組細(xì)胞凋亡率明顯低于IR組，

5、各組間差異顯著（P<0.05）。4、生化檢測(cè)結(jié)果顯示：IR組Ca2+-Mg2+-ATP酶及Na+-K+-ATP酶的活性明顯低于Sham組；SI組Ca2+-Mg2+-ATP酶及Na+-K+-ATP酶的活性顯著高于IR組，各組間差異顯著（P<0.05）。5、半定量RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示：Sham組腦組織bcl-2 mRNA， bax mRNA表達(dá)較低；IR組bcl-2mRNA表達(dá)略增高、bax mRNA表達(dá)顯著高于Sham組，而bcl-2

6、/bax比值顯著低于Sham組；SI組bcl-2 mRNA表達(dá)高于IR組， bax mRNA表達(dá)較IR組相比明顯降低，而bcl-2/bax比值顯著高于IR組。各組間差異顯著（P<0.05）。6、免疫組化檢測(cè)結(jié)果顯示：Sham組僅見少量的胞漿淡染呈棕黃色Caspase-3陽性細(xì)胞表達(dá)；而IR組，Caspase-3陽性細(xì)胞表達(dá)呈強(qiáng)陽性且陽性細(xì)胞數(shù)目明顯增加；SI組Caspase-3陽性細(xì)胞的染色及數(shù)目明顯低于IR組。各組間差異顯著（P<0.

7、05）。
　　結(jié)論：1、大鼠全腦缺血再灌注損傷時(shí)Ca2+-Mg2+-ATP酶及Na+-K+-ATP酶的活性降低；促凋亡基因bax mRNA表達(dá)升高而抑凋亡基因bcl-2 mRNA降低；Caspase-3蛋白表達(dá)增高。
　　2、大豆異黃酮可減輕大鼠全腦缺血再灌注損傷而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用
　　3、大豆異黃酮神經(jīng)保護(hù)的機(jī)理可能有：
　　1）提高Ca2+-Mg2+-ATP酶及Na+-K+-ATP酶的活性,調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)外的離子