色素形成相關(guān)蛋白在胚胎大鼠視網(wǎng)膜發(fā)育中的表達.pdf

1、目的： 觀察色素形成相關(guān)蛋白小眼球相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子（microphthalmia-associated transcription factor，MITF）、酪氨酸酶每（Tyrosinase）、酪氨酸酶相關(guān)蛋白1（tyrosinase related protein-1，TRP1）、視網(wǎng)膜色素上皮細胞65蛋白（retinal pigment epithelial protein-65，RPE65）在BN大鼠胚胎視網(wǎng)膜發(fā)育過程中的表達

2、情況，為探討色素相關(guān)性眼病和遺傳性視網(wǎng)膜變性疾病的病理機制、尋求視網(wǎng)膜色素上皮細胞（retinal pigment epithelial，RPE）更新、替代治療的新策略提供實驗依據(jù)。 方法： 根據(jù)胎齡和鼠齡，分別獲取E7組（胎齡第7天，embryo7）、E14組、P0組（相當(dāng)于E21的新生鼠、postnatal0）、W10組（出生后10周的成年鼠，week10）BN大鼠，用抽簽法隨機選取20眼（每只胎鼠只取1只眼做同種抗

3、體檢測），在光鏡和熒光顯微鏡觀察，采用免疫組織化學(xué)法檢測色素形成相關(guān)蛋白MITF、Tyrosinase、TRP1、RPE65在視網(wǎng)膜發(fā)育過程中的表達。 結(jié)果： 胚胎視網(wǎng)膜發(fā)育的形態(tài)學(xué)觀察：在胚胎第7天時，視杯形成，分內(nèi)外兩層。外層為無色素顆粒的假定的視網(wǎng)膜色素上皮層（retinal pigment epithelial，RPE），內(nèi)層為假定的神經(jīng)上皮層。胚胎14d時，外層色素上皮細胞呈單層排列，內(nèi)層神經(jīng)上皮層的細胞為16

4、～18層。胚胎21d（新生鼠）可見外成神經(jīng)細胞層和內(nèi)成神經(jīng)細胞層形成，內(nèi)成神經(jīng)細胞層的細胞向內(nèi)遷移為神經(jīng)節(jié)細胞層。成年大鼠神經(jīng)節(jié)細胞層、內(nèi)核層、外核層、視網(wǎng)膜色素上皮層均發(fā)育成熟、結(jié)構(gòu)清楚。 胚胎視網(wǎng)膜發(fā)育過程中色素形成相關(guān)蛋白的表達： 在胚胎第7天（E7），MITF、Tyrosinase、TRP1、RPE65均陰性表達。 在胚胎第14天（E14），MITF、Tyrosinase、TRP1免疫組織化學(xué)分析結(jié)果均顯

5、示：在視網(wǎng)膜內(nèi)層神經(jīng)上皮層及視網(wǎng)膜色素上皮層（RPE）的細胞胞核和胞漿中均出現(xiàn)明顯的棕黃色顆粒，為陽性表達；但RPE65陰性表達。 在新生期（P0），MITF、Tyrosinase、TRP1均陽性表達，表達部位和強度與E14大致相同。與E14相比，MITF在RPE中的表達組明顯增強，且強于在內(nèi)成神經(jīng)細胞層的表達。RPE65局限在視網(wǎng)膜色素上皮細胞的胞漿和胞核中表達。 在成年期（W10），MITF表達沉默：Tyrosina

6、se、TRP1在內(nèi)核層細胞漿和胞核中的表達強度較E14組、P0組下降；RPE65在RPE的表達強度下降。 結(jié)論： 1 BN大鼠的胚胎視網(wǎng)膜于胚胎第2周開始發(fā)育，在出生時尚未發(fā)育完全。 2 MITF在胚胎中晚期（E14～P0）的視網(wǎng)膜內(nèi)層神經(jīng)上皮層及視網(wǎng)膜色素上皮層（RPE）中表達，但在胚胎晚期的RPE中表達增強，在成年期（W10）表達沉默。 3 Tyrosinase、TRP1在中晚期胚胎的視網(wǎng)膜內(nèi)層神經(jīng)上