螺內(nèi)酯對(duì)2型糖尿病大鼠腎臟及NF-ΚB、MCP-1表達(dá)的影響.pdf

1、目的:觀察螺內(nèi)酯（Spironolactone,SPI）對(duì)2 型糖尿病大鼠血核因子-κ B （Nuclearfactor κ B，NF-κ B）、MCP-1 （monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1）的水平、尿MCP-1的排泄和腎組織NF-κ B、MCP-1的表達(dá)及對(duì)腎臟結(jié)構(gòu)、功能的影響。探討螺內(nèi)酯對(duì)T2DM 大鼠的腎臟保護(hù)作用及機(jī)制。
　　 方法:高糖高脂膳食、小劑量鏈脲佐菌素（str

2、eptozotocin，STZ）注射的方法建立2 型糖尿病大鼠模型，將成模的T2DM 大鼠隨機(jī)分為糖尿?。―M）組（10 只）和螺內(nèi)酯（SPI）組（10 只），繼續(xù)予以高糖高脂飼料喂養(yǎng)，對(duì)照（NC）組大鼠（10只）繼續(xù)予以基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)，其中SPI 組以螺內(nèi)酯20mg/kg/day 灌胃給藥，NC 組和DM 組灌以相應(yīng)量的生理鹽水。每周觀察各組大鼠的體重、血糖水平，第8 周時(shí)處死大鼠，收集血、尿及腎臟標(biāo)本，檢測(cè)大鼠血MCP-1(serum

3、 monocytechemoattractant protein，SMCP-1)、NF-κ B、糖化血紅蛋白(glycosylated hemoglobinA1c，HbA1c)、FBG、FINS、TG、TC、鉀(Hypokalemia)、尿白蛋白/肌酐(urinaryalbumin/creatinine ratio,ACR)比值和12 小時(shí)尿視黃醇結(jié)合蛋白(urinary retinolbinding-protein，URBP)及尿MC

4、P-1(urinary monocyte chemoattractant protein,UMCP-1)的排泄率，處死大鼠留取腎臟標(biāo)本計(jì)算腎臟肥大指數(shù)，應(yīng)用免疫組化檢測(cè)腎組織中MCP-1、NF-κ B表達(dá)水平，應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reversetranscription-polymerase chain reaction，RT-PCR)對(duì)腎臟組織中的MCP-1、NF-κ B 進(jìn)行半定量測(cè)定。同時(shí)在光鏡和電鏡下進(jìn)行病理學(xué)檢查，觀察腎臟

5、組織結(jié)構(gòu)變化。
　　 結(jié)果:
　　 1.第8 周，DM 組和S PI 組大鼠的FBG 水平和HbA1c 值均明顯高于NC 組（P<0.01），而DM 組和S PI 組大鼠之間的FBG 水平和HbA1c 值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P ＞0.05）；
　　 DM 組和SPI 組的FINS 與NC 組相比明顯升高（P<0.05），而SPI 組和DM 組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。
　　 2.第8 周，DM 組和S

6、PI 組大鼠的TC和TG 水平均明顯高于NC 組（P<0.01），而SPI組的TC和TG 水平較DM 組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P >0.05）；三組之間血鉀水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P >0.05）。3.第8 周，DM 組和S PI 組大鼠的NF-κ B、s MCP-1 水平和UMCP-1 排泄率以及ACR、URBP 排泄率和腎臟肥大指數(shù)均高于NC 組（P<0.01），SPI 組較DM 組均明顯降低（P<0.01）；且UMCP-1 排泄率、sMCP

7、-1、NF-κ B 分別與ACR、URBP 排泄率及腎臟肥大指數(shù)呈正相關(guān)（P<0.01）。
　　 4.第8 周腎組織免疫組化結(jié)果顯示DM 組和SPI 組大鼠腎小球和腎小管MCP-1、NF-κ B表達(dá)較NC 組顯著增強(qiáng)，SPI 組MCP-1、NF-κ B表達(dá)較DM 組有明顯減弱。
　　 5.第 8 周在光學(xué)顯微鏡下，NC 組腎組織形態(tài)學(xué)無(wú)明顯改變：腎小球毛細(xì)血管腔無(wú)狹窄，腎小管-間質(zhì)無(wú)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；DM 組腎組織形態(tài)學(xué)改變

8、較明顯：腎小球毛細(xì)血管袢塌陷，管腔閉塞，系膜區(qū)增寬，基膜增厚和系膜基質(zhì)增多，腎小球體積增大，細(xì)胞數(shù)量增多，出現(xiàn)玻璃樣變，腎小管尤其是近區(qū)小管腫脹、變性、空泡形成，腎間質(zhì)可見(jiàn)大量淋巴細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)。SPI組腎組織病變較輕，可見(jiàn)腎小球毛細(xì)血管管腔輕度狹窄，腎小管-間質(zhì)見(jiàn)少量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)；
　　 6.第 8 周在透視電子顯微鏡下可見(jiàn)NC 組腎小球基底膜(glomerular basementmembrane，GBM)厚度均勻一

9、致，未見(jiàn)足突(foot processes，F(xiàn)P)融合；DM 組GBM 厚薄不均、結(jié)構(gòu)模糊，F(xiàn)P 廣泛破壞和融合，足突融合率約達(dá)80％，系膜區(qū)基質(zhì)增多，系膜區(qū)擴(kuò)大，系膜細(xì)胞腫脹；SPI 組的GBM 無(wú)明顯增厚，GBM的微結(jié)構(gòu)相對(duì)規(guī)則，有少量FP 融合，足突融合率約達(dá)35％，系膜區(qū)細(xì)胞輕度增生。
　　 7.第8 周腎臟組織PT-PCR 結(jié)果顯示與NC 組相比，DM 組和SPI 組大鼠腎臟MCP-1mRNA、NF-κ BmRNA表達(dá)