CGRP對大鼠急性心肌梗死后心臟干細胞募集及其治療作用的實驗研究.pdf

1、目的
　　急性心肌梗死后移植干細胞的治療作用已得到廣泛認同,但細胞移植尚存在諸多問題,比如擴增周期長、免疫排斥、存活率低、歸巢量少、不能與宿主細胞通訊等限制了細胞移植治療的應用。而心臟自身的固有干細胞(CSC)的特性已在多項研究中得到證實,若能尋找一種能夠原位激活或募集CSCs的藥物或因子,可能是一種干細胞治療心肌梗死的新途徑。降鈣素基因相關肽(CGRP)廣泛分布于血管系統(tǒng),多項研究證實其對間充質干細胞、內皮細胞等具促增殖和遷移作

2、用,并且能上調體內bFGF、IGF-1、HGF等能調控CSC生物學作用的生長因子。因此,我們設想:CGRP對CSCs是否有類似作用,其心血管保護作用是否與CSC有一定關聯(lián)呢?為了回答這一問題,本實驗擬在大鼠體內實驗中,直接給予CGRP處理,觀察其對CSC是否具有募集作用,并初步探討其募集CSC的機制和對急性心肌梗死的治療作用。
　　方法
　　通過結扎左前降支建立大鼠急性心肌梗死模型。將104只健康SD大鼠隨機分為假手術組、對

3、照組、CGRP組。假手術組僅開胸,不結扎前降支,對照組在梗死后給予PBS心肌內注射,CGRP組在梗死后按10μg/㎏心肌內注射CGRP。各組于3d、7d、14d、28d處死動物,每個時間點保證每組6只。取得標本后,分別作HE、Masson染色、TTC染色觀察心臟形態(tài)學改變;超聲心動圖檢測心功能;免疫組織化學觀察心肌內血管新生;采用ELISA法檢測心肌組織內VEGF水平;免疫熒光染色觀察CSC募集情況。
　　結果
　　1.術后

4、4周HE染色顯示假手術組心肌排列整齊有序,無瘢痕組織;對照組大量心肌消失,較多纖維瘢痕組織增生,排列紊亂;CGRP組瘢痕組織明顯比對照組少,有較多正常心肌細胞存留。Masson染色顯示,假手術組心肌細胞呈紅色,未見藍染之膠原纖維;對照組可見大量藍色膠原纖維,膠原纖維內細胞核溶解消失,存活心肌細胞少;CGRP組膠原纖維較對照組明顯減少。
　　2.術后4周各組行超聲心動圖檢測LVDd、LVDs、FS和EF值。結果顯示,與假手術組相比,

5、對照組及CGRP組的LVDd和LVDs均增大,FS和EF減低;給予CGRP組較對照組以上心功能指標明顯改善(P<0.05)。
　　3. TTC染色顯示,假手術組未見梗死區(qū),而對照組梗死面積較大,為(31.72±4.00)％;與對照組相比,CGRP組梗死面積明顯縮小,為(22.54±1.73)%(P<0.05)。
　　4.免疫組織化學染色計數(shù)各組新生微血管結果提示,心肌梗死后梗死周圍區(qū)毛細血管較假手術組增加(P<0.01),而

6、CGRP較對照組增加更明顯(P<0.01).
　　5. ELISA法檢測心肌組織VEGF水平,對照組和CGRP組較假手術組于3天即明顯升高,7天達高峰,14天下降,28天時降至假手術組水平。其中在3、7、14天, CGRP組VEGF水平較對照組明顯增加(P<0.05)
　　6.免疫熒光染色檢測CSC募集情況,結果提示,對照組和CGRP組CSC細胞數(shù)在第3天即增加,7天達高峰,14天明顯減少。其中,各時間點中對照組較假手術組C