黃芩素和黃芩苷在豬前體脂肪細(xì)胞增殖與分化中的作用.pdf

1、本研究以豬為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，采用脂肪細(xì)胞離體培養(yǎng)技術(shù)，分離培養(yǎng)豬前體脂肪細(xì)胞。比較了不同年齡段豬前體脂肪細(xì)胞增殖與分化的差異；在此基礎(chǔ)上，應(yīng)用形態(tài)學(xué)觀察、油紅0染色提取、MTT比色、分光光度計(jì)、RT-PCR等方法，檢測(cè)了中藥成分黃芩素和黃芩苷對(duì)前體脂肪細(xì)胞增殖、分化的影響，并初步探討了其作用機(jī)制。研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下： 1、研究不同年齡段豬前體脂肪細(xì)胞增殖與分化的差異。實(shí)驗(yàn)以妊娠90天胎豬、1～3日齡仔豬和120日齡豬為對(duì)象，分離豬前體

2、脂肪細(xì)胞，通過(guò)形態(tài)學(xué)觀察、細(xì)胞貼壁計(jì)數(shù)、MTT比色、油紅O染色提取法，比較各組細(xì)胞形態(tài)以及增殖與分化的差異。結(jié)果表明，供體年齡影響豬前體脂肪細(xì)胞增殖、分化特性；妊娠90天胎豬及1～3日齡仔豬，是豬前體脂肪細(xì)胞來(lái)源的適宜材料。 2、研究黃芩素和黃芩苷對(duì)豬前體脂肪細(xì)胞增殖的影響。采用MTT比色法檢測(cè)了在不同濃度黃芩素和黃芩苷作用下，對(duì)豬前體脂肪細(xì)胞增殖能力的影響。結(jié)果表明，高濃度黃芩素和黃芩苷(160～640μmol/L)呈劑量依賴(lài)

3、性抑制豬前體脂肪細(xì)胞的增殖(P＜0.05)。低濃度的黃芩素(40μmol/L)對(duì)豬前體脂肪細(xì)胞增殖效應(yīng)不明顯(P＞0.05)，而低濃度的黃芩苷(20μmol/L)對(duì)豬前體脂肪細(xì)胞增殖有促進(jìn)作用(P＜0.05)，隨濃度升高促進(jìn)作用減弱。 3、研究黃芩素和黃芩苷對(duì)豬前體脂肪細(xì)胞分化的影響。采用油紅O染色提取法、形態(tài)學(xué)觀察法，檢測(cè)脂肪細(xì)胞內(nèi)甘油三酯積聚量的變化以及前體脂肪細(xì)胞充脂率、充脂程度及形態(tài)變化。結(jié)果表明，黃芩素和黃芩苷(40～

4、320μmol/L)以劑量依賴(lài)性方式抑制豬前體脂肪細(xì)胞的分化，且黃芩苷的抑制作用稍強(qiáng)于黃芩素。 4、研究黃芩素和黃芩苷對(duì)前體脂肪細(xì)胞分化相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄及FAS酶活性的影響。采用半定量RT-PCR技術(shù)分析40μmol/L、160μmol/L兩種濃度的黃芩素和黃芩苷對(duì)脂肪細(xì)胞分化特異轉(zhuǎn)錄因子PPARγ2、C/EBPα、生脂酶基因FAS及生長(zhǎng)因子IGF-1等基因mRNA表達(dá)的影響；分光光度計(jì)法檢測(cè)黃芩素對(duì)生脂酶FAS活性的影響。結(jié)果顯示

5、，黃芩苷可下調(diào)PPAR-γ2、FAS及IGF-1mRNA的表達(dá)，但對(duì)脂肪細(xì)胞另一特異轉(zhuǎn)錄因子C/EBPαmRNA表達(dá)差異不顯著(P＞0.05)，提示其抑制脂肪細(xì)胞分化可能與下調(diào)PPARγ2、FAS、IGF-1等基因mRNA表達(dá)有關(guān)，而與C/EBPα無(wú)關(guān)；而黃芩素除具有上述作用外，還可抑制FAS酶的活性。 以上研究為黃芩素和黃芩苷調(diào)控體脂沉積提供了理論依據(jù)，并從細(xì)胞和分子水平，對(duì)其調(diào)控體脂作用機(jī)制、預(yù)防和治療肥胖癥、高血壓、高血脂