纈沙坦抑制外源性血管緊張素Ⅱ促ApoE---小鼠動脈粥樣硬化的免疫機制研究.pdf

1、本文主要從以下幾個方面展開論述:
　　第一部分 纈沙坦對外源性血管緊張素Ⅱ促ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化中斑塊進展及穩(wěn)定性的研究
　　目的：觀察纈沙坦干預外源性血管緊張素Ⅱ促ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化進程中小鼠斑塊的穩(wěn)定性。
　　方法：建立對照組，血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）組，纈沙坦干預AngⅡ組的ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化模型，干預8周后，檢測三組小鼠的血壓、心率變化，體重以及血脂的變化；應用油紅O染色檢測小

2、鼠血管及主動脈根部斑塊面積，免疫組化檢測斑塊穩(wěn)定相關指標，Real-Time RT-PCR及Western-blot方法檢測小鼠斑塊內MMP-2，MMP-9的表達。
　　結果：與對照組比較，AngⅡ刺激組ApoE-/-小鼠血壓增高，AS進展加劇，且斑塊趨于不穩(wěn)定，RT-PCR和WB檢測血管斑塊MMP-2，MMP-9表達增加。而用纈沙坦干預組，血壓低于AngII刺激組，且則逆轉了AngⅡ刺激組的AS的進展，而且使斑塊趨于穩(wěn)定，且降低

3、了MMP-2，MMP-9的表達。三組之間的心率，體重，血脂均無統(tǒng)計學差異。
　　結論：纈沙坦可以使外源性血管緊張素Ⅱ促ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化進程中斑塊趨于穩(wěn)定。
　　第二部分 纈沙坦影響外源性血管緊張素Ⅱ促ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化進程中的機體免疫變化的研究
　　目的：動脈粥樣硬化（AS）的發(fā)生發(fā)展與適應性免疫密切相關，免疫機制亦可以影響斑塊的不穩(wěn)定性，由于第一部分證實了纈沙坦逆轉了血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）

4、促 ApoE-/-小鼠 AS進展的斑塊不穩(wěn)定，而具體免疫機制不明，本部分檢動物模型各組中免疫現象的改變，進一步探索纈沙坦促斑塊穩(wěn)定性的免疫學機制。
　　方法：建立對照組，血管緊張素Ⅱ組，纈沙坦干預血管緊張素Ⅱ組的ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化模型，干預8周后，用流式細胞技術檢測各組小鼠體內淋巴結內免疫細胞群的變化，用酶聯免疫印跡（ELISA）方法檢測小鼠血清中個炎性因子的變化，用實時定量（RT-PCR）方法檢測小鼠主動脈各免疫因子

5、的變化，用免疫組化方法檢測小鼠斑塊內炎癥細胞的浸潤及CD4+細胞的浸潤。
　　結果：流式細胞技術檢測了AngⅡ小鼠脾臟內CD4+T淋巴細胞的變化趨于Th1，Th17反應，而抑制了Th2，Tregs表達，且增強了小鼠體內脾臟細胞的成熟度，而纈沙坦組則表現的相反的結果，ELISA方法檢測的小鼠體內血清中，Ang Ⅱ組Th1，Th17細胞分泌的細胞因子譜比對照組明顯降低，而纈沙坦組則使Ang Ⅱ組的趨于Th2，Tregs的細胞因子譜的分

6、泌。RT-PCR檢測的小鼠主動脈基因的表達與ElISA檢測細胞因子譜一致。
　　結論：纈沙坦逆轉了AngⅡ促小鼠AS進展中適應性免疫的失衡，進而使斑塊趨于穩(wěn)定的免疫學機制。
　　第三部分 纈沙坦通過IL-5抗血管緊張素II促ApoE-/-動脈粥樣硬化進程的作用研究
　　目的：纈沙坦抗AngⅡ促ApoE-/-動脈粥樣硬化進程中，誘導了Th2的分化，而尤其升高了Th2分泌的細胞因子IL-5，本部分通過中和IL-5細胞因子，

7、觀察纈沙坦抗AS進展的作用。
　　方法：本部分實驗動物分為兩組，分別為對照組纈沙坦干預外源性AngⅡ促ApoE-/-小鼠模型腹腔注射同型蛋白，干預組為纈沙坦干預外源性AngⅡ促ApoE-/-小鼠模型腹腔注射IL-5中和抗體，觀察兩組小鼠血壓，以及主動脈根部的斑塊進展及斑塊的穩(wěn)定性及炎癥細胞的浸潤情況。
　　結果：IL-5抗體中和組加重了AS的進展，而對小鼠血壓沒有影響。
　　結論：纈沙坦通過Th2分泌的IL-5發(fā)揮了抗