K562細(xì)胞誘導(dǎo)分化過(guò)程中WT1基因表達(dá)及其異構(gòu)體比例變化的研究.pdf

1、目的：應(yīng)用熒光定量RT-PCR技術(shù)，分析K562細(xì)胞株誘導(dǎo)分化過(guò)程中WT1基因及其四種異構(gòu)體表達(dá)水平及比例變化。探討WT1基因與細(xì)胞分化的關(guān)系，進(jìn)一步闡明WT1基因在造血系統(tǒng)細(xì)胞增殖、分化中發(fā)揮的作用。 方法:1.建立熒光定量檢測(cè)系統(tǒng)。2.培養(yǎng)K562細(xì)胞，應(yīng)用終濃度為10ng/ml佛波酯(12-tetradecanoylphorbol-13-acetate，TPA)誘導(dǎo)K562細(xì)胞分化，并采用NBT(硝基四氮唑藍(lán))還原實(shí)驗(yàn)及細(xì)

2、胞免疫表型檢測(cè)判斷細(xì)胞分化程度。3.實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)定量檢測(cè)K562誘導(dǎo)分化過(guò)程中總WT1基因及其17aa+，KTS+兩類(lèi)異構(gòu)體的表達(dá)水平，β-actin作為內(nèi)參照。在此基礎(chǔ)上計(jì)算出WT1(+/+)、WT1(+/-)、WT1(-/+)、WT1(-/-)四種異構(gòu)體在細(xì)胞分化過(guò)程中表達(dá)水平及比例的變化。 結(jié)果:1.以陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行三條標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的建立，其相關(guān)系數(shù)均達(dá)0.995以上。2.隨著藥物作用時(shí)間增加，NBT陽(yáng)性率及C

3、D9表達(dá)陽(yáng)性率均明顯增加(p＜0.05)。3.K562細(xì)胞誘導(dǎo)分化過(guò)程中總WT1出現(xiàn)兩次高表達(dá)。17aa+、KTS+兩類(lèi)異構(gòu)體隨藥物作用時(shí)間的延長(zhǎng)，其表達(dá)比例均逐漸下降。四種異構(gòu)體比例變化不一致。WT1(+/+)比例逐漸下降，0小時(shí)占0.40±0.19，96小時(shí)比例為0.15±0.07。而WT1(-/-)比例逐漸上升，0小時(shí)為0.15±0.11，96小時(shí)為0.38±0.12，另外兩種異構(gòu)體比例變化沒(méi)有顯著性差異。 結(jié)論:1.TP