抗p-185的His6-H520C9scFv的真核載體、穩(wěn)定細胞株構(gòu)建及其蛋白活性研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁，還剩66頁未讀， 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內(nèi)容提供方，若內(nèi)容存在侵權(quán)，請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、目的：
　　構(gòu)建和鑒定表達抗p185且含His6標簽的H520C9scFv的真核表達載體,將其轉(zhuǎn)染入293細胞。經(jīng)過G418的篩選,建立穩(wěn)定表達His6-H520C9scFv的293細胞株,用RT-PCR、Westernblot檢測His6-H520C9scFv的表達,及細胞免疫熒光法證明其可與表達p185的腫瘤細胞靶向結(jié)合。
　　方法：
　　以pcDNA-H520C9scFv-hIL-2質(zhì)粒為模板,通過PCR獲得H5

2、20C9scFv片段,將此片段通過基因重組插入真核表達質(zhì)粒pcDNA3.1(+)中。設(shè)計引物在H520C9scFv片段C端增加His6標簽和凝血酶識別序列,再與質(zhì)粒pcDNA3.1(+)連接,構(gòu)建真核表達載體pcDNA3.1-His6-H520C9scFv。對所得的重組基因進行限制性內(nèi)切酶EcoRI、HindIII雙酶切及瓊脂糖凝膠電泳鑒定,并測定目的序列。用LipofectamineLTXandPLUS將重組質(zhì)粒pcDNA3.1-Hi

3、s6-H520C9scFv轉(zhuǎn)染進入293細胞,通過G418進行篩選,構(gòu)建穩(wěn)定表達His6-H520C9scFv的293細胞株。用RT-PCR、Westernblot檢測His6-H520C9scFv在293細胞中的表達,免疫熒光法檢測His6-H520C9scFv融合蛋白與表達p185的人乳腺癌細胞SK-Br3的特異結(jié)合。
　　結(jié)果：
　　成功擴增出H520C9scFv片段;成功構(gòu)建重組質(zhì)粒pcDNA3.1-His6-H52

4、0C9scFv;RT-PCR、Westernblot檢測到293細胞中His-H520C9scFv的表達;免疫熒光法證明His6-H520C9scFv融合蛋白可與帶表達p185的人乳腺癌細胞SK-Br3的特異結(jié)合。
　　結(jié)論：
　　本研究成功構(gòu)建了真核表達載體pcDNA3.1-His6-H520C9scFv,并建立了穩(wěn)定表達His-H520C9scFv的293細胞株,證明了His-H520C9scFv融合蛋白可與HER2陽性

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽，若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理，對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容，請與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論