缺氧對(duì)乳腺癌MDA-MB-435細(xì)胞細(xì)胞骨架重構(gòu)的影響以及Rho-ROCK信號(hào)通路的作用.pdf

1、研究背景：缺氧是實(shí)質(zhì)性腫瘤微環(huán)境的基本特征之一，有研究表明缺氧可以促進(jìn)腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。細(xì)胞骨架的重構(gòu)是腫瘤細(xì)胞遷移過(guò)程中，黏附和運(yùn)動(dòng)能力改變的基礎(chǔ)，而小G蛋白家族(包括Rho，Rac和Cdc42)對(duì)細(xì)胞骨架重構(gòu)起到關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用。Rho相關(guān)相關(guān)蛋白激酶(Rho-associated kinase，ROCK)是Rho的主要效應(yīng)分子，激活后能夠增強(qiáng)細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力.由此我們推測(cè)：缺氧引起乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)可能和ROCK被激活、細(xì)胞骨架發(fā)

2、生改變而使細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力增強(qiáng)有關(guān)。 目的：觀察缺氧對(duì)細(xì)胞肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架重組、細(xì)胞黏附性和細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力的影響；探討Rho/ROCK信號(hào)通路在缺氧引起肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架重組過(guò)程中的作用。 方法：高轉(zhuǎn)移潛能的人乳腺癌細(xì)胞株(MDA-MB-435細(xì)胞)用于以下實(shí)驗(yàn).實(shí)驗(yàn)分三組：(1)對(duì)照組：在37℃、5％CO2條件下培養(yǎng)；(2)缺氧組：置于37℃，含95％N：和5％CO2的條件下培養(yǎng)16h；(3)Y-27632+缺氧組：用Y-27

3、632(10μmol/L)預(yù)處理細(xì)胞1h，然后繼續(xù)缺氧培養(yǎng)16h。熒光染色法觀察細(xì)胞骨架的分布，免疫印跡法觀察細(xì)胞漿成分和細(xì)胞骨架成分中肌動(dòng)蛋白的含量；噻唑藍(lán)比色法(MTT)檢測(cè)細(xì)胞對(duì)人工重組基底膜(Matrigel)的黏附能力：?jiǎn)螌蛹?xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力。結(jié)果：免疫熒光標(biāo)記結(jié)果中，缺氧使MDA-MB-435細(xì)胞內(nèi)F-肌動(dòng)蛋白含量增加、外周黏著斑樣結(jié)構(gòu)消失；胞漿和骨架蛋白的免疫印跡實(shí)驗(yàn)中，缺氧時(shí)的骨架中肌動(dòng)蛋白的含量增加，說(shuō)明肌動(dòng)