神經(jīng)調(diào)節(jié)因子對(duì)ErbB2非過(guò)表達(dá)乳腺癌細(xì)胞增殖侵襲轉(zhuǎn)移的作用及機(jī)制.pdf

1、目的：應(yīng)用ErbB2受體功能抑制劑AG825，探討在ErbB2非過(guò)表達(dá)乳腺癌細(xì)胞中是否存在神經(jīng)調(diào)節(jié)因子（neuregulin，NRG）/ErbB2這種配體作用方式的信號(hào)通路的活化，進(jìn)而研究神經(jīng)調(diào)節(jié)因子通過(guò)NRG/ErbB2信號(hào)通路方式對(duì)ErbB2非過(guò)表達(dá)乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231增殖、侵襲轉(zhuǎn)移的作用及分子機(jī)制。 方法：以人ErbB2非過(guò)表達(dá)乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231和MCF-7為研究對(duì)象，臺(tái)盼藍(lán)拒染法和細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)細(xì)胞生

2、長(zhǎng)曲線(xiàn)，免疫細(xì)胞化學(xué)法和Western-blot法檢測(cè)細(xì)胞中NRG蛋白表達(dá)。應(yīng)用ErbB2受體功能抑制劑AG825處理兩株細(xì)胞，噻唑蘭比色（MTT）法檢測(cè)比較兩株細(xì)胞的增殖抑制作用，求出AG825作用MDA-MB-231細(xì)胞48h的中效濃度IC50。40μmol/L AG825處理MDA-MB-231細(xì)胞48h，Transwell小室進(jìn)行人工重組基底膜（Matrigel）侵襲和運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)；明膠酶譜法檢測(cè)細(xì)胞分泌的基質(zhì)金屬蛋白酶2（matr

3、ix metalloproteinase2，MMP-2）、基質(zhì)金屬蛋白酶9（matrix metalloproteinase9，MMP-9）的變化；Western-blot檢測(cè)細(xì)胞中MMP-2、突變型p53（mutantp53，mtp53）和缺氧誘導(dǎo)因子-1α（hypoxia-inducible factor-1 alpha，HIF-1α）蛋白表達(dá)；RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞中HIF-1α mRNA表達(dá)的變化；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡

4、。 結(jié)果：MDA-MB-231細(xì)胞較MCF-7細(xì)胞具有較強(qiáng)的增殖生長(zhǎng)能力。免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)顯示在MDA-MB-231細(xì)胞內(nèi)呈NRG顯著表達(dá)，MCF-7細(xì)胞中無(wú)NRG表達(dá)。Western-blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)MDA-MB-231細(xì)胞可見(jiàn)分子量44KD的NRG抗體陽(yáng)性反應(yīng)條帶。應(yīng)用ErbB2受體功能抑制劑AG825后，MDA-MB-231細(xì)胞的增殖抑制作用明顯，AG825作用MDA-MB-231細(xì)胞48h的IC50為56.59μmol

5、/L。40μmol/L AG825處理MDA-MB-231細(xì)胞48h后，細(xì)胞的侵襲、遷移能力均下降（P<0.05）；MMP-2、MMP-9的活性降低（P<0.05）；MMP-2蛋白表達(dá)減少（P<0.05）；mtp53、HIF-1α蛋白表達(dá)減少（P<0.05）；HIF-1α，mRNA表達(dá)減少（P<0.05）；細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期（P<0.05）；細(xì)胞凋亡增加（P<0.05）。 結(jié)論：ErbB2非過(guò)表達(dá)乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-