CD38缺失對LPS誘導巨噬細胞炎性因子表達和分泌的影響及其分子機制.pdf

1、目的：動脈粥樣硬化是許多心血管疾病的重要成因。大量的實驗證據和臨床資料表明，炎癥反應在動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用，其機制與巨噬細胞等炎性細胞浸潤并分泌大量炎性因子，促使泡沫細胞生成等密切相關。CD38是具有ADPR(ADP-ribosyl)環(huán)化酶和水解酶活性的雙功能酶，它可分別催化NAD+生成cADPR和催化cADPR降解成ADPR，其酶活性位點均定位于胞外結構域。我們的前期實驗顯示，CD38基因缺失可使高脂飲食誘導的Apo

2、E基因敲除小鼠動脈粥樣硬化損傷明顯加重。本文旨在探討CD38對巨噬細胞活化的影響及其可能的分子機制，從而為進一步闡明CD38在動脈粥樣硬化形成中的作用及其機制提供線索和實驗依據。
　　方法：⑴巨噬細胞的誘導和培養(yǎng):給野生型和CD38基因敲除小鼠腹腔注射0.5ml3％巰基乙醇酸鈉誘導其巨噬細胞分泌，三天后收集小鼠腹腔的巨噬細胞并進行體外培養(yǎng)，經鑒定后用于后續(xù)實驗。⑵巨噬細胞基因表達及炎性因子分泌:取原代培養(yǎng)的腹腔巨噬細胞并用LPS(

3、1μg/ml)對其進行刺激，實驗分為4組每組3個樣本：野生型(W.T.)未刺激組；野生型(W.T.) LPS刺激組；CD38-/-未刺激組；CD38-/-LPS刺激組。利用RT-PCR或實時熒光定量PCR技術對TLR4和相關炎性因子如TNF-α，IL-1β及巨噬細胞炎癥趨化因子MCP-1的mRNA表達量進行檢測，同時用Western Blot技術對NF-κ3蛋白表達量進行分析。
　　結果：①鏡下觀察細胞形態(tài)，與文獻描述相符，確認為

4、巨噬細胞。②CD38缺失使LPS誘導巨噬細胞炎性因子分泌及相關蛋白表達升高。LPS刺激后W.T.組與CD38-/-組均出現(xiàn)TLR4表達量升高，炎性因子TNF-α，IL-1β及炎癥趨化因子MCP-1分泌增加；與LPS刺激W.T.組比較，CD38-/-組中TLR4及NF-κB表達量顯著升高；LPS刺激后CD38-/-組炎性因子TNF-α，IL-1β及炎癥趨化因子MCP-1分泌量較W.T.組增加。
　　結論：LPS可明顯誘導CD38-/