天麻素對體外培養(yǎng)雪旺細胞增殖及其NGF表達的影響.pdf

1、目的：通過實驗觀察天麻素(Gastrodin)對體外培養(yǎng)雪旺細胞(Schwann Cell,SCs)增殖及NGF表達的影響。
　　方法：取出生3-5天SD大鼠10只,解剖顯微鏡下無菌取出坐骨神經(jīng),剪碎后進行細胞培養(yǎng),經(jīng)過純化后進行細胞傳代培養(yǎng),用S-100免疫組化鑒定雪旺細胞的純度,然后分別用濃度為0.1mg/ml、0.05mg/ml、0.025mg/ml的天麻素血清+DMEM培養(yǎng)基進行培養(yǎng),應用MTT觀測雪旺細胞增長曲線,采用共

2、焦激光掃描顯微鏡技術對傳代雪旺細胞內NFG表達水平進行測定。
　　結果：接種48h可看到貼壁生長的雪旺細胞,其胞核多為長形或圓形;胞體呈現(xiàn)立體感、飽滿的梭形體,兩端有細長的突起,周圍有亮帶。第5d起,細胞胞體開始肩并肩平行排列,自第10日,呈現(xiàn)出“端端相對,極極相對”等網(wǎng)狀或旋渦狀規(guī)律排列,形如“地毯”。經(jīng)過S100免疫組化檢測,結果顯示培養(yǎng)的坐骨神經(jīng)雪旺細胞純度達到92％。MTT比色實驗結果顯示:正常對照組中,雪旺細胞在24~7

3、2h出現(xiàn)快速增殖態(tài)勢;72h后繼續(xù)增殖,但速度減緩,OD值逐日緩慢下降;自第5d起于倒置相差顯微鏡下可見雪旺細胞的胞體出現(xiàn)膨大、形態(tài)的立體感減弱。雪旺細胞增殖趨勢0.1mg/ml天麻素組與正常組相近,但每一個時間點較正常組峰值均低,自48h開始與正常組出現(xiàn)顯著差異。0.05mg/ml天麻素組雪旺細胞呈現(xiàn)持續(xù)快速增殖現(xiàn)象,48h開始與天麻1組出現(xiàn)差異,72h與正常組出現(xiàn)差異。0.025mg/ml天麻素組雪旺細胞總體增殖趨勢和OD值均與正常

4、組相近,48h開始于0.1mg/ml天麻素組出現(xiàn)差異,72h與0.05mg/ml天麻素組出現(xiàn)差異。共焦激光掃描顯微鏡自采集圖像顯示:天麻素濃度為0.05mg/ml時,雪旺細胞內NGF的表達水平較其它各組別高,天麻素濃度為0.1mg/ml時,雪旺細胞內NGF的表達水平最差。
　　結論：1、雪旺細胞的增殖分化程度可以直接影響NFG的表達水平。2、天麻素濃度為0.1mg/ml時持續(xù)應用,可在一定程度內對雪旺細胞的增殖分化以及NFG表達產(chǎn)