白血病干細胞的分離培養(yǎng)和免疫相關(guān)分子表達的研究.pdf

1、目的:分離培養(yǎng)急性髓系白血病(acute myeloid leukemia)患者來源白血病干細胞(leukemia stem cells),以及非白血病造血干細胞,檢測兩者在TGF-βmRNA和IL-10mRNA上是否有差別,探討急性髓系白血病中白血病干細胞在免疫逃逸方面的表現(xiàn),為進一步研究白血病干細胞及其免疫逃逸機制提供一點幫助。
　　方法:采用淋巴細胞分離液分離急性髓系白血病病人和非白血病人骨髓中的單個核細胞,PBS洗滌稀釋后

2、懸浮培養(yǎng)。通過流式細胞儀檢測并分選符合熒光抗體標(biāo)記的白血病干細胞(CD34+CD38-CD123+)及造血干細胞(CD34+CD38-CD123-),分選后細胞一部分繼續(xù)培養(yǎng)并鑒定其干細胞性,一部分提取RNA,RT-PCR檢測TGF-βmRNA和IL-10mRNA是否表達及其表達情況。
　　結(jié)果:1.形態(tài)學(xué)觀察:新鮮急性髓系白血病病人骨髓單個核細胞,多混有少量紅細胞,倒置相差顯微鏡觀察細胞大小相對均勻,圓形或類圓形,折光性強;瑞氏

3、染色可見細胞大小相對均勻,核質(zhì)比大;隨著培養(yǎng)時間的延長,細胞克隆形成,細胞克隆增多增大,但瑞氏染色可見細胞分化明顯,細胞大小差別增大,胞膜多不規(guī)則,有皺褶,核質(zhì)比大小不一。2.共培養(yǎng):未用絲裂霉素處理的基質(zhì)細胞做飼養(yǎng)層的共培養(yǎng)體系同絲裂霉素處理后的基質(zhì)細胞做飼養(yǎng)層的共培養(yǎng)體系比較,有更多的鵝卵石細胞形成區(qū)且細胞相對更多。3.流式檢測分析:骨髓單個核細胞中的CD34標(biāo)記的細胞比例是動態(tài)變化的,CD34+CD38-CD123+細胞比例同培養(yǎng)

4、時間成正比。4.RT-PCR:骨髓單個核細胞表達TGF-βmRNA和IL-10mRNA,同一細胞群中mRNA的表達TGF-β>IL-10。
　　結(jié)論:
　　1.白血病人骨髓單個核細胞培養(yǎng)更容易形成細胞集落,其中可能存在白血病干細胞。
　　2.本實驗研究提示白血病干細胞可能存在于CD34+CD38-CD123+細胞群。
　　3.本實驗研究提示未經(jīng)絲裂霉素處理的基質(zhì)細胞做飼養(yǎng)層的共培養(yǎng)可以更好的擴增干細胞。