EB病毒對WIF1基因甲基化和表達影響的研究.pdf

1、EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)為嗜淋巴細胞病毒屬的DNA腫瘤病毒，EBV感染與部分胃癌發(fā)生的關系已經(jīng)確認，EBV相關胃癌(EBV-associated gastric carcinoma，EBVaGC)約占胃癌總數(shù)的10％。EBVaGC發(fā)生的表觀遺傳學機制的研究主要涉及EBV感染對抑癌基因啟動子區(qū)甲基化的影響，以及EBV非編碼RNA對宿主基因表達調控作用兩個方面。
　　目的：明確EBV感染對Wnt抑制因子

2、1(Wnt inhibitory factor-1，WIF1)編碼基因啟動子區(qū)甲基化以及EBV編碼miRNA BART19-3p對 WIF1表達的影響，為進一步探討EBV抑制WIF1表達，進而異常激活Wnt原癌基因通路參與EBVaGC發(fā)生發(fā)展的作用機制提供實驗基礎。
　　方法：選取2種EBV陽性胃癌細胞系GT38、GT39和3種EBV陰性胃癌細胞系HGC-27、MKN-45、SGC7901作為研究對象，采用實時熒光定量PCR(Re

3、al time quantitative PCR，real time qPCR)檢測上述細胞系WIF1表達水平，亞硫酸氫鹽基因組測序法(Bisufite genomic sequencing，BGS)檢測WIF1基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)。并分別采用5-Aza-CdR、BART19-3p模擬物以及抑制物作用EBV陽性胃癌細胞系GT38和EBV陰性胃癌細胞系HGC-27，檢測藥物作用前后2種細胞系WIF1和β-catentin表達水平的變化以

4、及細胞增殖情況。
　　結果：①BGS檢測結果結果顯示，5種胃癌細胞系WIF1啟動子區(qū)均呈高甲基化狀態(tài)，甲基化率均在85%以上。②real time qPCR結果顯示，胃癌細胞系中WIF1表達普遍下調，以EBV陽性細胞系GT38和GT39下降更為明顯；5-Aza-CdR作用后GT38和HGC-27兩種細胞系WIF1表達均上調，其中HGC-27上調更為顯著；同時，Western Blot顯示兩種細胞系β-catenin水平均下調。③E

5、BV陰性細胞系HGC-27轉染外源性BART19-3p模擬物后，WIF1表達進一步下調，β-catenin水平升高，細胞增殖率增加。④EBV陽性細胞GT38轉染外源性BART19-3p抑制物后，WIF1表達水平升高，β-catenin表達水平下調，細胞生長抑制率增加。
　　結論：①EBV陰性和陽性細胞系中WIF1表達水平均較低，EBV陽性細胞系中表達缺失或下調情況更為明顯，去甲基化試劑5-Aza-CdR處理可不同程度上調GT38及

6、HGC-27細胞系WIF1表達，EBV陰性細胞系HGC-27上調更為明顯。②外源性BART19-3p模擬物轉染EBV陰性細胞系HGC-27可進一步抑制WIF1表達，抑制β-Catenin降解，促進其積聚。提示BART19-3p可拮抗WIF1對Wnt/β-catenin信號通路的抑制作用，進而在 EBV相關腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用。③外源性BART19-3p抑制物轉染EBV陽性細胞系GT38可抑制EBV編碼的BART19-3p的作用，WI