牦牛種間雜交早期胚胎體外發(fā)育的研究.pdf

1、本研究對影響牦牛種間雜交早期胚胎體外生產(chǎn)的幾個重要因素進行了探索，初步建立了牦牛種間雜交早期胚胎體外發(fā)育體系，為探索異種配子受精的發(fā)育過程及犏牛受胎率低、流產(chǎn)率高的原因，提供有力的實驗手段，為牦牛雜交改良提供科學依據(jù)，對西部牧業(yè)經(jīng)濟的發(fā)展具有重要的現(xiàn)實意義。研究結(jié)果如下： 1.抽吸法和抽吸加切割法采集牦牛和當?shù)攸S牛卵母細胞，抽吸法平均從每個卵巢采集的可用卵母細胞數(shù)(4.45VS4.67)極顯著低于抽吸加切割法采集的可用卵母細胞數(shù)

2、(6.33VS7.28)。2.牦牛卵巢表面卵泡卵母細胞在成熟液A(M199+10％FBS+75mg/L青霉素+50mg/L鏈霉素)中的成熟率(75.56％)高于在成熟液B(在A的基礎(chǔ)上添加1.0mg/LFSH)的成熟率(72.73％)，低于在成熟液C(在A的基礎(chǔ)上添加0.5mg/LFSH)培養(yǎng)的成熟率(78.57％)，但三者無顯著差異(P＞0.05)，這表明適量的FSH可促進牦牛卵母細胞的體外成熟，F(xiàn)SH的劑量超過一定濃度時對牦牛卵母細

3、胞的體外成熟有不利影響。在成熟液D(在C的基礎(chǔ)上添加5.0mg/LLH和1.0mg/L17β-E2)和成熟液E(在D的基礎(chǔ)上添加55mg/L丙酮酸鈉)中的成熟率(81.43％VS82.76％)高于前三者，且E液的成熟率高于D液的成熟率，表明55mg/L丙酮酸鈉促進牦牛卵母細胞成熟。E液為本實驗室條件下牦牛卵母細胞體外成熟的最佳培養(yǎng)液。 3.牦牛卵巢表面卵泡卵母細胞的成熟率(81.29％VS67.74％)極顯著高于牦牛卵巢內(nèi)卵泡卵

4、母細胞的成熟率(P＜0.01)。 4.以BO液為受精基礎(chǔ)液，荷斯坦奶牛凍精體外受精牦牛卵母細胞，精子濃度為0.4×106～0.6×106/ml時的卵裂率(28.49％VS49.15％、50.34％)極顯著地低于精子濃度為4×106～6×106/ml和40×106～60×106/ml時的卵裂率(P＜0.01)，后兩者無顯著差異(P＞0.05)；精子濃度為0.4×106～0.6×106/ml和4×106～6×106/ml時，種間雜交

5、胚胎的桑囊胚率(3.95％、3.53％VS1.38％)顯著高于精子濃度為40×106～60×106/ml時的桑囊胚率(P＜0.05)。精卵共培養(yǎng)6h的卵裂率(35.97％VS49.15％、49.32％)顯著的低于精卵共培養(yǎng)24h和48h的卵裂率(P＜0.05)；精卵共培養(yǎng)24h的桑囊胚率(3.53％VS2.00％、2.82％)高于精卵共培養(yǎng)6h和48h的桑囊胚率，但差異不顯著(P＞0.05)。因此，荷斯坦奶牛凍精體外受精牦牛卵母細胞，精

6、子適宜濃度為4×106～6×106/ml，受精適宜時間為24h。 5.野牦牛凍精與牦牛卵母細胞受精的早期胚胎與輸卵管上皮細胞共培養(yǎng)的桑囊胚率(10.40％VS7.71％)高于與顆粒細胞單層共培養(yǎng)的桑囊胚率，但兩者無顯著差異(P＞0.05)；這兩者的桑囊胚率極顯著高于在SOF和CRlaa液中的桑囊胚率(0、0)(P＜0.01)。因此，與輸卵管上皮細胞共培養(yǎng)，是克服牦牛胚胎8～16細胞期發(fā)育阻斷的有效方法。 6.建立的牦牛種