番茄抗灰霉菌基因YLS9-LIKE的克隆和功能鑒定.pdf

1、通過對本實(shí)驗(yàn)室的300多份重測序材料進(jìn)行灰霉菌的接病，經(jīng)過三次重復(fù)接病，根據(jù)接病后的病斑面積的差異與重測序番茄的SNP差異關(guān)聯(lián)分析，從而得到了與番茄灰霉病抗性顯著相關(guān)的10個(gè)SNP位點(diǎn)，從中篩選候選基因并對基因進(jìn)行功能驗(yàn)證。其中，YLS9-LIKE(YL)的超量表達(dá)轉(zhuǎn)基因植株的感病性相對背景材料 A57顯著增強(qiáng)。YLS9-LIKE與擬南芥中的HIN1和煙草中的SDR1同源性較高，其與衰老和SA依賴的抗病性相關(guān)。接下來對YLS9-LIKE

2、做進(jìn)一步的功能驗(yàn)證，結(jié)果如下：
　　1.對YLS9-LIKE的超量和干涉轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行接病，接病結(jié)果顯示，與A57相比，超量轉(zhuǎn)基因植株的感病性明顯增強(qiáng)，干涉轉(zhuǎn)基因植株的感病性沒有發(fā)生明顯改變。
　　2.YLS9-LIKE的超量轉(zhuǎn)基因植株從苗期就呈現(xiàn)出顏色變淺，經(jīng)測定是因?yàn)槿~綠素含量下降引起的,還導(dǎo)致了植株變矮。
　　3.相對于A57，YLS9-LIKE的超量轉(zhuǎn)基因植株的葉片通過甲苯胺藍(lán)染色發(fā)現(xiàn)葉片的滲透性增加。

3、　　4.相對于A57，YLS9-LIKE的葉片的果膠含量顯著減少，經(jīng)果膠酶酶解面積顯著變小。
　　5.相對于A57，在灰霉菌接病后，YLS9-LIKE的超量轉(zhuǎn)基因植株的活性氧爆發(fā)更快，更嚴(yán)重。
　　6.在 A57的組織表達(dá)譜中，生理后期的YLS9-LIKE的表達(dá)量較前期要高，說明YLS9-LIKE可能與生長發(fā)育和衰老相關(guān)。
　　7.酵母雙雜交和BIFC結(jié)果顯示，YLS9-LIKE與rbcS3b。而Rbcs3b是光合作用