番茄中SARK同功能基因的篩選與克隆.pdf

1、隨著基因重組以及遺傳轉化等技術體系的發(fā)展，植物轉基因技術不斷完善并得到日益廣泛的應用，在培育優(yōu)質、高產(chǎn)和抗逆植物新品種方面存在巨大潛力。葉片衰老是葉片發(fā)育的最后一個階段，研究葉片衰老不僅有助于了解其發(fā)育過程，也可通過調控衰老進程來提高農(nóng)作物的產(chǎn)量或延長農(nóng)產(chǎn)品的貯藏期，促進其在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)實踐的應用。
　　本課題以模式番茄Micro-Tom(SolanumlycopersicumL.)為實驗材料，利用番茄轉化技術得到了GVG:GUS轉基

2、因番茄植株，對T0代植株進行分子鑒定，T1代幼苗進行誘導染色，以確定目的基因的轉入及其遺傳穩(wěn)定性。利用GVG:GUS轉基因番茄通過GUS組織化學染色確定了GVG誘導體系(誘導劑是地塞米松dexamethasone， DEX)，并以此為對照。取苗齡20天左右長勢一致的幼苗，誘導24h時的半定量RT-PCR結果顯示GVG:AtSARK各株系DEX處理后都有AtSARK基因的表達;誘導一周后可以觀察到與野生型及GVG:GUS對照株系相比，At

3、SARK基因的表達對GVG:AtSARK轉基因番茄造成非常嚴重的影響，植株生長受到抑制，早衰致死。
　　將DEX誘導的GVG:AtSARK幼苗提取RNA送芯片分析，通過對芯片數(shù)據(jù)的分析，篩選出表達上調基因，發(fā)現(xiàn)過表達AtSARK的轉基因番茄中，LRR162基因表達上調，可能參與葉片衰老過程。為了進一步分析該基因的功能，克隆該基因并構建了GVG誘導型過表達的雙元表達載體，將其轉化入Micro-Tom中，得到了GVG:LRR162抗性