應(yīng)用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)測(cè)定大鼠血漿中Thailandepsin B及其藥代動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、背景：Thailandepsin B（TDP-B）TDP-B是一種具有抗腫瘤作用的組蛋白脫乙?；敢种苿?。腫瘤細(xì)胞中組蛋白脫乙?；府惓１磉_(dá)，從而導(dǎo)致組蛋白大部分呈低乙酰化狀態(tài)。組蛋白去乙酰化酶抑制劑通過(guò)調(diào)整腫瘤細(xì)胞中組蛋白異常的乙?；癄顟B(tài)，使組蛋白乙酰化水平增高，誘導(dǎo)特定基因表達(dá)增加，從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞凋亡，達(dá)到抗腫瘤作用效果。
　　目的：闡明TDP-B在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特征，為TDP-B的成藥性評(píng)價(jià)及其進(jìn)一步的開(kāi)發(fā)提供科學(xué)依

2、據(jù)。
　　方法：首先，開(kāi)發(fā)和驗(yàn)證基于液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)（LC-MS/MS）的測(cè)定大鼠血漿中TDP-B含量的生物分析方法。然后，對(duì)三組大鼠分別經(jīng)尾靜脈給予3.00mg/kg、9.00mg/kg、27.0mg/kg劑量的TDP-B并采集給藥后不同時(shí)間點(diǎn)的血樣。通過(guò)測(cè)定大鼠血漿樣品中的TDP-B濃度，獲得TDP-B的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，并考察藥代動(dòng)力學(xué)的暴露值（曲線下面積）與劑量之間的線性關(guān)系。樣品的LC-MS/MS分析方法優(yōu)化主要體現(xiàn)在樣品預(yù)處

3、理和制備方法、色譜分離條件和質(zhì)譜檢測(cè)參數(shù)等方面的優(yōu)化。通過(guò)在全血和血漿樣品加入酸和酯酶抑制劑的樣品預(yù)處理方法解決了TDP-B在生物基質(zhì)中不穩(wěn)定問(wèn)題。樣品制備主要是通過(guò)采用乙酸乙酯溶劑對(duì)血漿樣品進(jìn)行液液萃取的方式完成。色譜分析采用梯度洗脫程序完成，其流動(dòng)相A由0.1％甲酸+5mM甲酸銨組成,流動(dòng)相B由甲醇/乙腈(8/2,V/V)組成，流速為0.800mL/min；色譜柱為Phenomenex Gemini C18柱（50 mm×2.0mm

4、,5μm）。質(zhì)譜檢測(cè)采用電噴霧離子源（ESI）并在正離子模式下采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式對(duì)分析物進(jìn)行定量分析。定量分析時(shí)，分析物TDP-B和內(nèi)標(biāo)非索非那定所選用的MRM離子對(duì)分別為m/z530.3→277.2和m/z502.5→466.2。根據(jù)美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）對(duì)生物樣品分析方法驗(yàn)證法規(guī)的要求，本研究對(duì)方法的特異性、靈敏度、線性范圍、精密度與準(zhǔn)確度、基質(zhì)效應(yīng)、回收率及穩(wěn)定性等參數(shù)進(jìn)行了相關(guān)考察。在完成生物分析方法完整驗(yàn)證

5、后，對(duì)所有藥代動(dòng)力學(xué)研究中的大鼠血漿樣品中的TDP-B進(jìn)行定量分析，并應(yīng)用Winnolin軟件計(jì)算獲得 TDP-B的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。此外，本研究還對(duì)血漿樣品中檢測(cè)到的一個(gè)代謝產(chǎn)物（M）的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了初步鑒定。
　　結(jié)果及結(jié)論：其一、在樣品預(yù)處理過(guò)程中，通過(guò)在全血和血漿中加入0.25％甲酸、0.625％鹽酸和2.5mM Dichlorvos混合穩(wěn)定劑，TDP-B在大鼠血漿及全血當(dāng)中的穩(wěn)定性問(wèn)題得到解決。其二、本研究成功建立了基于LC-

6、MS/MS測(cè)定大鼠血漿中TDP-B濃度的分析方法。本方法的線性范圍為1.00-1000ng/mL，具有較高的靈敏度（LLOQ為1.00ng/mL）和較短的分析時(shí)間（3.7min/每個(gè)樣品），具有較好的批內(nèi)、批間精密度（RSD≤10.9％）和較好的準(zhǔn)確度（RE％為-6.7％-15％）。其三、大鼠藥代動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果表明，TDP-B在3.00mg/kg-27.0mg/kg的劑量范圍內(nèi)的藥時(shí)曲線下面積與劑量呈正比，符合線性動(dòng)力學(xué)特征。其四、初步

7、推測(cè)大鼠真實(shí)樣品中的一個(gè)代謝產(chǎn)物（M）為TDP-B在體內(nèi)還原成TDP-B*后再發(fā)生氧化反應(yīng)生成的一相代謝產(chǎn)物。
　　意義：首先，本研究開(kāi)發(fā)的增加TDP-B在大鼠全血和血漿樣品中穩(wěn)定性的樣品預(yù)處理方法為確保TDP-B的準(zhǔn)確測(cè)定及后續(xù)的藥代動(dòng)力學(xué)研究奠定了基礎(chǔ)，也為其他在生物基質(zhì)樣品中不穩(wěn)定藥物的樣品預(yù)處理方法提供了借鑒。其次，本研究首次建立了快速、靈敏、可靠的測(cè)定大鼠血漿中TDP-B的生物分析方法，進(jìn)而獲得TDP-B在大鼠體內(nèi)的藥代