MTDH-siRNA下調(diào)MTDH基因表達(dá)對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞增殖、凋亡、遷移的影響.pdf

1、研究背景：
　　原發(fā)性肝癌(簡(jiǎn)稱肝癌)是臨床上常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率逐年上升，據(jù)報(bào)道，全球每年新增50多萬(wàn)肝癌患者，其中約有一半在我國(guó)，病死率居我國(guó)惡性腫瘤的第二位。目前肝癌治療方法有限，肝臟部分切除及肝移植是潛在的最佳選擇，但僅僅只有10％-20%的患者有條件進(jìn)行治療；對(duì)不能手術(shù)切除的中晚期肝癌患者，微創(chuàng)治療雖能一定程度控制局部腫瘤病灶生長(zhǎng)，緩解局部癥狀但無(wú)法根治腫瘤，大多數(shù)肝癌患者最終死于腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移，因此，迫切需要

2、尋求一種安全、更有效、低毒的治療方法。近期研究發(fā)現(xiàn)MTDH/AEG-1具有癌基因的功能，能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲轉(zhuǎn)移，增加腫瘤耐藥性，在許多惡性腫瘤中參與腫瘤進(jìn)展的各主要過(guò)程。相比良性肝腫瘤及正常肝組織細(xì)胞，MTDH/AEG-1在肝癌組織和培養(yǎng)的肝癌細(xì)胞中表達(dá)明顯升高。本課題擬在建立采用HepG2肝癌細(xì)胞系，通過(guò)小干擾RNA技術(shù)(small interfering RNA,siRNA)下調(diào)MTDH的表達(dá)，觀察其對(duì)肝癌細(xì)胞增殖、遷移、凋亡

3、等生物學(xué)行為的影響,通過(guò)以上研究來(lái)驗(yàn)證以MTDH/AEG-1作為靶點(diǎn)是否能有效預(yù)防和抑制肝癌生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移。
　　目的：
　　探討研究干擾下調(diào)MTDH基因表達(dá)對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞增殖、遷移和凋亡的影響。
　　方法：
　　采用siRNA技術(shù)，下調(diào)肝癌HepG2細(xì)胞MTDH基因的表達(dá)，免疫細(xì)胞化學(xué)及Western bolt實(shí)驗(yàn)檢測(cè)干擾效果。MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)MTDH基因下調(diào)對(duì)HepG2細(xì)胞增殖的影響，TUNEL細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)檢

4、測(cè)細(xì)胞凋亡情況，流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測(cè)細(xì)胞周期，劃痕實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞遷移能力，RT-PCR檢測(cè) Bcl-2、Bax mRNA表達(dá)驗(yàn)證促進(jìn)細(xì)胞凋亡情況。
　　結(jié)果：
　　通過(guò)MTDH-siRNA干擾下調(diào)MTDH基因表達(dá)后，肝癌HepG2細(xì)胞增殖能力明顯下降，作用48小時(shí)和96小時(shí)的增殖抑制率分別達(dá)到43.8%和64.6%；細(xì)胞明顯阻滯于靜止期（G0）或 DNA合成前期（G1），細(xì)胞凋亡速比例增加，凋亡率增加23.46%，細(xì)胞遷移