姜黃素聯(lián)合氟尿嘧啶對(duì)人肝癌HepG2細(xì)胞增殖及凋亡的影響.pdf

1、目的:肝癌是常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，嚴(yán)重影響人類的生活健康。氟尿嘧啶(FU)是一類臨床廣泛應(yīng)用的抗代謝腫瘤藥物，阻斷腫瘤細(xì)胞內(nèi)的RNA和DNA合成，達(dá)到抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用。然而高劑量時(shí)毒副作用大以及對(duì)肝癌的療效不足等在一定程度上限制了其臨床使用。姜黃素(CU)是一類從傳統(tǒng)中藥姜黃等植物提取的酚類化合物。近年研究表明，姜黃素能通過(guò)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡以及阻滯細(xì)胞周期等機(jī)制發(fā)揮明顯抑制腫瘤生長(zhǎng)的功效。其對(duì)機(jī)體正常細(xì)胞無(wú)明顯毒

2、性作用使其成為當(dāng)下的研究熱點(diǎn)。本研究擬從體外角度，觀察姜黃素聯(lián)合氟尿嘧啶對(duì)人肝癌HepG2細(xì)胞生長(zhǎng)的協(xié)同抑制作用。通過(guò)CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活力，雙染流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況，進(jìn)一步利用Western Blot技術(shù)檢測(cè)凋亡通路蛋白active Caspase-3和細(xì)胞存活通路蛋白Bcl-2的表達(dá)情況。
　　方法:將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人肝癌HepG2細(xì)胞隨機(jī)分為CU單用組、FU單用組、CU+FU聯(lián)用組、陰性對(duì)照組，藥物作用時(shí)間72h，通過(guò)

3、CCK-8法測(cè)算藥物對(duì)各組細(xì)胞活力的抑制作用;AnnexinⅤ/PI雙染流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率;用Western Blot技術(shù)檢測(cè)凋亡通路蛋白active Caspase-3和細(xì)胞存活通路蛋白Bcl-2的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:CCK-8檢測(cè)結(jié)果顯示，不同濃度CU(3.125、6.25、12.5、25、37.5、50、100μM)單獨(dú)作用人肝癌HepG2細(xì)胞72h后，其對(duì)應(yīng)的細(xì)胞抑制率分別為20.59±2.88％、33.53±

4、4.63％、49.63±3.37％、64.05±3.62％、66.83±4.16％、73.08±5.29％、80.40±2.23％,不同濃度FU(3.125、6.25、12.5、25、37.5、50、100μM)單獨(dú)作用人肝癌HepG2細(xì)胞72h后，其對(duì)應(yīng)的細(xì)胞抑制率分別為25.66±3.85％、42.15±3.58％、58.05±5.06％、65.92±4.42％、72.89±5.04％、77.14±3.93％、82.39±4.90％

5、，不同比例濃度CU與FU聯(lián)合作用人肝癌HepG2細(xì)胞72h，F(xiàn)U∶CU=1∶2時(shí)，F(xiàn)U+CU(3.125+6.25、6.25+12.5、12.5+25、25+50、50+100μM)作用后的抑制率為36.66±3.85％、63.15±2.58％、76.05±2.06％、82.92±3.41％、95.89±5.03％(P＜0.05), FU∶CU=2∶1時(shí)，F(xiàn)U+CU(6.25+3.125、12.5+6.25、25+12.5、50+25、

6、100+50μM)作用后的抑制率為30.58±2.87％、57.52±2.63％、72.62±1.36％、79.04±1.61％、93.82±2.16％(P＜0.05)，由此可計(jì)算出中效濃度IC50。單用CU(IC50:15.32±2.60μM)或FU(IC50:11.03±1.86μM)細(xì)胞活力明顯抑制，CU與FU聯(lián)合用藥可進(jìn)一步顯著抑制細(xì)胞活力，表現(xiàn)為聯(lián)合用藥后CU的IC50降為10.86±0.61μM(CU∶FU=2∶1)和11.

7、53±1.73μM(CU∶FU=1∶2)(P＜0.05),FU為4.18±0.89μM(CU∶FU=2∶1)和8.28±1.89μM(P＜0.05)。上述4組對(duì)細(xì)胞活力抑制均呈現(xiàn)明顯的劑量遞增趨勢(shì)。雙染流式結(jié)果顯示，單用CU(25μM)、單用FU(12.5μM)以及CU(25μM)+FU(12.5μM)聯(lián)合用藥組的細(xì)胞凋亡率分別為7.08％，16.36％和20.43％。Western Blot結(jié)果進(jìn)一步顯示，與單藥組相比，聯(lián)合用藥顯著上