不同構(gòu)型脂聯(lián)素對香煙煙霧提取物誘導(dǎo)人支氣管上皮細(xì)胞TNF-a和IL-8表達(dá)的影響.pdf

1、研究背景
　　支氣管上皮是保護(hù)氣道組織免受外界侵害的第一道生理屏障，同時在系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)中也起著非常重要的作用。研究資料表明，香煙能夠誘導(dǎo)氣道上皮細(xì)胞產(chǎn)生炎癥因子，造成氣道慢性炎癥和持續(xù)損傷，最終形成慢性阻塞性肺疾病(COPD)。脂聯(lián)素(adiponectin)是一種由脂肪組織分泌的大分子蛋白質(zhì)，在血清中，以全長結(jié)構(gòu)[三倍體，六倍體以及高等分子量體(highmolecularweight，HMW)]和球型結(jié)構(gòu)域(globulara

2、diponectin，gAd)存在。脂聯(lián)素全長結(jié)構(gòu)主要激活脂聯(lián)素受體2，而球型結(jié)構(gòu)域主要激活脂聯(lián)素受體1，各型脂聯(lián)素通過激活其相應(yīng)的受體發(fā)揮調(diào)節(jié)糖脂代謝、抗動脈粥樣硬、有抗炎、減少氧化應(yīng)激和內(nèi)皮保護(hù)作用。目前相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，高等分子量體脂聯(lián)素（HMW）在單核巨噬細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞中發(fā)揮抗炎作用，球型結(jié)構(gòu)域脂聯(lián)素（gAd)可以誘發(fā)巨噬細(xì)胞凋亡。也有學(xué)者提出球型結(jié)構(gòu)域脂聯(lián)素（gAd)具有抵抗血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡、保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞的作用。但目前尚未

3、檢索到不同構(gòu)型脂聯(lián)素對支氣管上皮細(xì)胞的作用。
　　目的
　　通過研究高等分子量體脂聯(lián)素和球形結(jié)構(gòu)域脂聯(lián)素對香煙霧提取物誘導(dǎo)的人支氣管上皮細(xì)胞TNF-a和IL-8表達(dá)的影響，探討不同構(gòu)型脂聯(lián)素在氣道慢性炎癥中的作用。
　　方法
　　采用16HBECs細(xì)胞株進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)。
　　(1)CSE對16HBECs的抑制作用與半數(shù)抑制濃度：
　　16HBECs常規(guī)培養(yǎng)后接種于24孔培養(yǎng)板中，隨機(jī)分為對照組和實(shí)驗(yàn)組。

4、對照組加入對照培養(yǎng)液，實(shí)驗(yàn)組分別用2.5％、5%、7.5%、10%濃度的CSE干預(yù)細(xì)胞，常規(guī)培養(yǎng)24h后MTT比色法檢測不同濃度的CSE對16HBECs的抑制作用。
　　(2)不同構(gòu)型脂聯(lián)素對CSE誘導(dǎo)16HBECs表達(dá)TNF-a和IL-8蛋白的干預(yù)作用：
　　16HBECs常規(guī)培養(yǎng)后接種于6孔培養(yǎng)板中，隨機(jī)分為對照組、5%CSE組、高等分子量體脂聯(lián)素（HMW）干預(yù)組和球形結(jié)構(gòu)域脂聯(lián)素（gAd）干預(yù)組。對照組加入對照培養(yǎng)液；

5、5%CSE組加入5%濃度CSE孵育24h；HMW干預(yù)組先以5、10、20ug/ml的HMW預(yù)處理細(xì)胞2h，再與5％CSE共同孵育24h；gAd干預(yù)組先以5、10、20ug/ml的gAd預(yù)處理細(xì)胞2h，再與5％CSE共同孵育24h，收集各組的細(xì)胞上清液，，ELISA法檢測上清液中TNF-a和IL-8蛋白含量。
　　結(jié)果
　　(1)CSE對16HBECs的抑制作用：
　　16HBECs與不同濃度CSE培養(yǎng)24h后，CSE組

6、與對照組比較，CSE對16HBECs有顯著的抑制作用，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05），且隨著藥物濃度的增加，CSE對細(xì)胞的抑制作用增強(qiáng)，呈劑量--效應(yīng)關(guān)系。CSE對16HBECs的半數(shù)抑制濃度約為5%。
　　(2)CSE對16HBECsTNF-a和IL-8蛋白表達(dá)水平的影響
　　5％CSE組TNF-a和IL-8蛋白含量均高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)
　　(3)不同構(gòu)型脂聯(lián)素對5％CSE誘導(dǎo)16H

7、BECsTNF-a蛋白表達(dá)水平的影響
　?、?個不同濃度HMW干預(yù)組TNF-a蛋白含量均低于5％CSE組，但高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。
　?、?0ug/mlHMW干預(yù)組TNF-a蛋白含量低于5ug/mlHMW干預(yù)組高于20ug/mlHMW干預(yù)組。
　?、?個不同濃度gAd干預(yù)組TNF-a蛋白含量均低于5％CSE組，但高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。
　?、?0ug/mlg

8、Ad干預(yù)組TNF-a蛋白含量低于5ug/mlgAd干預(yù)組高于20ug/mlgAd干預(yù)組。
　　(4)不同構(gòu)型脂聯(lián)素對5％CSE誘導(dǎo)16HBECsIL-8蛋白表達(dá)水平的影響
　?、?ug/mlHMW干預(yù)組IL-8蛋白含量雖低于5％CSE組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；與對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。10ug/ml和20ug/mlHMW干預(yù)組IL-8蛋白含量均低于5％CSE組，但高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)

9、意義(均P<0.01)。
　?、?0ug/mlHMW干預(yù)組IL-8蛋白含量低于5ug/mlHMW干預(yù)組高于20ug/mlHMW干預(yù)組。
　?、?個不同濃度gAd干預(yù)組IL-8蛋白含量均低于5％CSE組，但高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。
　　④10ug/mlgAd干預(yù)組IL-8蛋白含量低于5ug/mlgAd干預(yù)組高于20ug/mlgAd干預(yù)組。
　　結(jié)論
　　(1)HMW和gAd兩種不同構(gòu)