杏鮑菇中SOD的分離純化、脂質體制備及其抑制腫瘤細胞活性研究.pdf

1、在細胞的氧化代謝過程中，不斷產生各種活性氧。在細胞處于正常狀態(tài)時，細胞內的抗氧化系統(tǒng)起著清除自由基的作用，使細胞處于一個氧化平衡狀態(tài)。但當機體處于衰老、氧化應激或某些病理情況下時，活性氧產生增多或機體清除能力減弱，過量的活性氧對組織細胞的化學結構發(fā)生破壞性修飾，損傷正常組織細胞的形態(tài)和功能。SOD是生物體防御活性氧毒害的關鍵性防線。研究表明，SOD與癌癥等多種疾病之間有著極其密切的關系。本課題以杏鮑菇為原材料，通過超聲波破碎、硫酸銨分級

2、沉淀、離子交換層析、凝膠過濾層析等方法分離純化了SOD，并通過UV、MALDI-TOF-TOFMS、ICP-MS、SDS-PAGE、HPLC等分析方法對該SOD的類型及純度進行了鑒定。此外，通過單因素考察和正交實驗的方法優(yōu)化了SOD脂質體的制備工藝，并研究了所制得SOD脂質體的生物學功能。
　　 本課題以杏鮑菇子實體為原料，分離純化得到了液相純的SOD，活性為3900U/mg，純化倍數為177倍，回收率為13.0％。在提取過程中

3、對超聲破碎功率、破碎時間、層析順序等因素進行了優(yōu)化，最終選擇的超聲功率是160W，超聲時間為9min。MALDI-TOF-TOF質譜儀測定結果顯示，該SOD分子量為31503，亞基分子量為15790;ICP-MS顯示該SOD含銅和鋅而不含錳；紫外光譜顯示該SOD在258nm處具有最大吸收；活性抑制實驗結果顯示該SOD對雙氧水和疊氮鈉敏感，而對SDS不敏感；這些證據均證明該SOD為Cu/Zn-SOD。
　　 本文以脂質體的包封率及

4、粒徑為評價指標，在單因素考察磷脂與膽固醇比例、超聲時間、水相pH值及水相體積對制備脂質體包封率影響的基礎上，利用正交設計方法對SOD脂質體的制備工藝進行了優(yōu)化。最終確定SOD脂質體的制備條件為PC∶CH=1∶1,pH值為8.2，超聲時間為8min，水相體積為3mL。穩(wěn)定性實驗結果表明，所制備的SOD脂質體在2個月內滲漏率小于20％。
　　 本文以制備得到的SOD脂質體作為藥物，并以未包封SOD作為對照，研究了SOD脂質體抑制肝癌

5、細胞生長的能力。結果顯示，SOD脂質體能很好地抑制肝癌細胞hepG2和肝正常細胞L02生長，而未包封SOD則未顯示出任何抑制作用。將白藜蘆醇制成脂質體后，則發(fā)現包封前與包封后白藜蘆醇抑制細胞生長作用的變化不大。對SOD脂質體作用后細胞內SOD活性及ROS含量的測定結果表明，加入SOD脂質體后，細胞內SOD活性增加，ROS含量減少。說明SOD抑制肝癌細胞生長的機理可能是SOD進入細胞并清除了細胞內的ROS，導致了細胞的凋亡，而未包封SOD