脂質體制備和電融合實驗研究.pdf

1、脂質體是磷脂雙分子層膜在水相中組裝成的內部為水相的閉合囊泡。脂質體具有雙親性、生物相容性，和細胞膜及細胞器膜具有類似的結構，在美容、食品、醫(yī)藥和生物化學研究等領域得到了廣泛的應用。粒徑大于1μm的大脂質體是一種常用的轉染工具，另外它還是很好的探索細胞功能的工具，可以作為微反應器來模擬細胞或細胞器，研究體內的生物化學反應，以及細胞膜的結構、功能和膜穿孔、融合的機制等。大脂質體的制備方法主要有傳統(tǒng)的薄膜蒸發(fā)法、兩相蒸發(fā)法和新興的電場制備法、

2、微流控制備法等，各種方法制備得到的脂質體具有不同的特性。
　　 脂質體融合技術能夠促發(fā)微量物質間的反應，模擬體內細胞或細胞器內的生物化學反應，實現在微觀水平對生命體內的各種生物化學反應進行研究。另外在基因轉染、細胞器監(jiān)測、藥物定點傳送和細胞膜蛋白的生物物理學研究等方面有很重要的意義，還可作為研究細胞膜融合機理的模型。對脂質體融合技術的研究經歷了物理促進融合、脂質體群電融合、微操作-電脈沖結合的融合法等幾個發(fā)展階段。其中微操作-電

3、脈沖結合的脂質體融合法實現了對脂質體的可控融合，與其他方法相比具有精確操作、可控制性強、融合率高等優(yōu)點，但仍存在設備昂貴、操作方法復雜、耗時長等缺點。近年來，又涌現出一種基于微電極芯片的脂質體電融合技術。本課題組研制了多種電融合芯片，并成功應用于多種細胞的高效率電融合。脂質體融合和細胞融合的本質都是膜融合。為了制備一種適合于脂質體電融合的微電極芯片，本文將利用課題組已有的電融合芯片進行脂質體電融合實驗，摸索脂質體融合的條件，為進一步開展

4、脂質體.細胞融合和脂質體電融合芯片的研制奠定基礎。
　　 本文首先對薄膜分散法、兩相蒸發(fā)法、電場制備法等大脂質體制備方法進行了對比實驗研究，同時研究了膽固醇含量以及離心處理對大脂質體穩(wěn)定性的影響，并最終制備電融合用的脂質體懸液。然后利用課題組現有的兩種電融合芯片分別搭建了實驗平臺，在平臺上開展了脂質體電融合的相關實驗：基于PI基底的電融合芯片和基于硅玻基底的電融合芯片上的脂質體排隊實驗研究；基于硅玻基底的電融合芯片上的脂質體電融