14-3-3epsilon在喉癌中表達和功能研究.pdf

1、頭頸部鱗狀細胞癌(Squamous Cell Carcinoma of Head and Neck,SCCHN)被世界公認為第六大腫瘤,在世界范圍內每年報道50多萬新增病例。喉痛是呼吸道第二大常見惡性腫瘤,占所有惡性腫瘤的2％～3％,在我國,特別是東北地區(qū),喉癌的發(fā)病率呈逐年上升趨勢。早期喉癌通常以單純放療或手術切除為主,對于進展期喉癌,在世界范圍內,全喉切除術仍然是首選的治療方法。5-氮雜胞苷(5-azacytidine)或5-脫氧氮

2、雜胞苷(5-aza-deoxy-cytidine,5AZA-CDR)是DNA甲基轉移酶抑制劑。5-氮雜胞苷通過降低基因啟動子區(qū)域的甲基化程度,使某些因啟動子區(qū)被甲基化而失活的腫瘤抑制基因被重新激活,可達到治療腫瘤的目的。
　　 前期,我們利用二維電泳(TWO dimensional electrophoresis,2-DE)和質譜技術對經5-Aza-CdR處理前后的喉癌Hep-2細胞系進行篩查,鑒定出若干表達差異蛋白如14-3-

3、3epsilon等。14-3-3epsilon參與多種生物過程如細胞周期、細胞增殖以及細胞凋亡等的調控,并且在神經發(fā)生以及惡性腫瘤形成的過程中具有重要的作用。
　　 目前,14-3-3epsilon在喉癌發(fā)生中的功能以及調節(jié)機制并不十分清楚,因此,本研究將通過對14-3-3epsilon在LSCC中的表達及生物特性的分析,探討14-3-3epsilon在喉鱗狀細胞癌(laryngeal squamous cell carcino

4、ma,Lscc)的發(fā)生和發(fā)展中的作用。
　　 材料與方法
　　 以喉鱗癌組織標本為實驗材料,應用RT-PCR和Western Blot檢測喉鱗癌組織中14-3-3epsilon基因的表達水平,應用統(tǒng)計學方法分析臨床資料與14-3-3epsilon表達水平之間的關系。
　　 構建14-3-3epsilon.GFP表達載體,轉染喉癌細胞系Hep-2,通過熒光顯微鏡和RT-PCR觀察并檢測轉染前后Hep-2細胞中14-

5、3-3epsilon基因表達水平。應用MTT、流式細胞術、Transwell分別檢測過表達14-3-3epsilon基因對Hep-2細胞增殖能力、細胞周期、細胞凋亡水平以及體外侵襲能力等生物學特性的影響。
　　 實驗結果
　　 1、在喉癌組織中,14-3-3epsilon mRNA及蛋白質表達水平明顯低于癌旁對照組織;14-3-3epsilon蛋白質在轉移淋巴結中的表達水平較喉癌組織中的表達水平更低;14-3-3epsi

6、lon蛋白質在喉癌臨床Ⅲ期或Ⅳ期癌組織中的表達水平明顯低于在I期或Ⅱ期癌組織中的表達水平。
　　 2、構建重組表達載體14-3-3epsilon-GFP,經雙酶切及菌液測序檢測,結果準確無誤。
　　 3、與空白對照組相比,在轉染GFP組及14-3-3epsilon-GFP組中,Hep-2活細胞的百分數(shù)分別為71.68±12.10％和36.68±14.09％(P<0.05)。
　　 4、空白對照組、轉染GFP組和轉

7、染14-3-3epsilon-GFP組中,Hep-2細胞處于細胞周期S期的百分數(shù)分別為22.47±3.36％,28.17±3.97％和46.15±6.82％(P<0.05),處于凋亡亞G1期的百分數(shù)分別為1.23±1.02％,2.92±1.59％和13.72±3.89％fP<0.05)。
　　 5、在空白對照組、轉染GFP組和轉染14-3-3epsilon-GFP組中,晚期凋亡細胞的百分數(shù)分別為0.84±0.25％,1.08±0

8、.24％以及2.93±0.13％(P<0.001)。
　　 6、在空白對照組、轉染GFP組以及轉染14-3-3epsilon-GFP組中,穿過Transwell小室濾膜的細胞數(shù)分別為20.65±1.94,17.63±1.04以及9.1±0.24(P<0.001)。
　　 結論：1、14-3-3epsilon在喉癌中的低表達促進了喉癌的發(fā)生及進展。2、14-3-3epsilon在喉癌中具有促進癌細胞凋亡以及抑制癌細胞侵襲的