hTERT基因啟動(dòng)子調(diào)控腺病毒介導(dǎo)Canstatin基因治療卵巢上皮性癌的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目前無(wú)論治療與否，晚期卵巢癌患者的預(yù)后都不佳。在美國(guó)，每年大約有26600例卵巢癌新患者，而每年直接死于卵巢癌的患者約14500例。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全世界卵巢癌總發(fā)病人數(shù)大約每年19.1萬(wàn)，而由于卵巢癌疾病的隱匿性，僅僅只有23％的卵巢癌患者能在病變?cè)缙诒辉\斷出來(lái)。晚期卵巢癌患者雖然接受了綜合治療，但是從確診之日起，5年存活率不超過(guò)30％，所以卵巢痛又通常被稱(chēng)為無(wú)聲殺手（silent killer）。因此臨床上迫切需要特異有效的治療方法，以期改

2、善晚期卵巢癌患者的預(yù)后。
　　 研究認(rèn)為，血管形成（Angiogenesis）在腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移過(guò)程中起著關(guān)鍵的作用。如果沒(méi)有腫瘤的血管系統(tǒng)發(fā)生，實(shí)體腫瘤超過(guò)幾個(gè)毫米將不能生長(zhǎng)。此外，血管形成的越密集，腫瘤生長(zhǎng)的速度就越快，轉(zhuǎn)移的可能性就越大。在血管生成過(guò)程中，Ⅳ型膠原（TypeⅣ collagen）扮演重要角色。Ⅳ型膠原是構(gòu)成血管基底膜的主要成分之一，能促進(jìn)細(xì)胞的黏附、遷徙、分化、生長(zhǎng)。研究認(rèn)為，Ⅳ型膠原是一個(gè)可以調(diào)節(jié)腫瘤血管

3、形成的潛在治療靶點(diǎn)。
　　 人血管能抑素Canstatin，是繼endostatin之后新發(fā)現(xiàn)的一個(gè)內(nèi)源性血管生成抑制因子（endogenous inhibitor of angiogenesis），來(lái)源于血管基底膜Ⅳ型膠原α2鏈C末端球形非膠原區(qū)（noncollagenous domain of collagen typeⅣα2-chains，non-collagenousl，NC1）。NC1區(qū)參與α鏈的組裝，對(duì)Ⅳ型膠原三聚體

4、的形成起關(guān)鍵作用，影響著血管基底膜的形成，而血管基底膜對(duì)于新血管形成是非常重要的。關(guān)于canstatin基因的研究已闡明，canstatin能抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)和遷移，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，通過(guò)抑制腫瘤血管形成而有效抑制腫瘤移植瘤的生長(zhǎng)。有關(guān)研究表明，腫瘤移植瘤內(nèi)系統(tǒng)注射canstatin基因重組子能有效的抑制體內(nèi)異體胰腺癌、前列腺癌和乳腺癌移植瘤的生長(zhǎng)。然而，Canstatin基因?qū)θ寺殉采掀ば园┦欠裼行В瑖?guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)報(bào)道。
　

5、　 端粒酶是一種核糖核蛋白復(fù)合物，在絕大多數(shù)惡性腫瘤細(xì)胞中呈陽(yáng)性表達(dá)，而在正常體細(xì)胞中則一般為陰性。研究認(rèn)為，人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（human telomerase reverse transcriptase，hTERT）基因的活性在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起著非常重要作用，并且在癌癥的基因治療中已經(jīng)成為一個(gè)新的治療靶點(diǎn)。有大量的證據(jù)表明hTERT基因核心啟動(dòng)子作為啟動(dòng)子可以調(diào)控治療多種實(shí)體腫瘤，包括結(jié)腸癌、肺癌、肝癌及前列腺癌、卵巢癌等。

6、研究表明hTERT啟動(dòng)子調(diào)控的腺病毒復(fù)制主要集中在腫瘤細(xì)胞內(nèi)，而對(duì)端粒酶陰性的正常細(xì)胞不起作用。
　　 為了探討canstatin基因?qū)θ寺殉采掀ば园┮浦擦龅寞熜В⑹筩anstatin基因治療具有靶向性，該課題構(gòu)建hTERT基因核心啟動(dòng)子調(diào)控的Canstatin基因重組腺病毒（Adxsi-GFP-hTERT-Canstatin，AdhTERT-Can），體外通過(guò) Lipofectamin介導(dǎo)轉(zhuǎn)染卵巢上皮性癌HO8910PM細(xì)胞

7、株，研究其對(duì)卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，同時(shí)建立裸鼠移植瘤動(dòng)物模型，研究重組腺病毒AdhTERT-Can對(duì)卵巢上皮性癌移植瘤的抑制作用，以期為卵巢癌canstatin基因靶向治療提供理論依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)分為以下兩部分：
　　 第一部分人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（hTERT）基因啟動(dòng)子canstatin基因重組腺病毒載體的構(gòu)建。
　　 第二部分重組腺病毒AdhTERT-Can體外感染卵巢上皮性癌細(xì)胞株HO8910PM實(shí)驗(yàn)及其體內(nèi)抑瘤實(shí)驗(yàn)。

8、r>　　 結(jié)論:
　　 1.成功地構(gòu)建了hTERT基因核心啟動(dòng)子調(diào)控canstatin基因重組腺病毒AdhTERT-Can。
　　 2.構(gòu)建的重組腺病毒 AdhTERT-Can能夠感染卵巢上皮性癌細(xì)胞，為進(jìn)一步研究canstatin基因治療卵巢上皮性癌移植瘤提供了一個(gè)良好的載體。
　　 3.體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)重組腺病毒AdhTERT-Can對(duì)卵巢上皮性癌細(xì)胞的生長(zhǎng)周期無(wú)明顯影響。
　　 4.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)重組腺

9、病毒AdhTERT-Can不但能明顯抑制卵巢上皮性癌移植瘤的生長(zhǎng)，而且對(duì)卵巢上皮性癌移植瘤的抑制作用具有靶向性。
　　 5.重組腺病毒AdhTERT-Can能夠通過(guò)抑制腫瘤的血管生成而抑制卵巢上皮性癌移植瘤的生長(zhǎng)。
　　 6.canstatin基因抑制卵巢上皮性癌移植瘤生長(zhǎng)的作用機(jī)制可能是：誘導(dǎo)腫瘤組織高表達(dá)凋亡效應(yīng)因子caspase-3，增加卵巢腫瘤細(xì)胞的凋亡；降低Flk-1的表達(dá)，抑制腫瘤的血管生成。
　　

10、7.重組腺病毒 AdhTERT-Can在治療卵巢上皮性癌移植瘤的同時(shí)，對(duì)心、肝、腎等重要臟器組織無(wú)明顯影響。
　　 本研究創(chuàng)新點(diǎn)：
　　 1、首次應(yīng)用分子克隆技術(shù)將canstatin基因構(gòu)建于hTERT啟動(dòng)子下游，使canstatin的治療作用受hTERT啟動(dòng)子的調(diào)控，并成功地構(gòu)建了hTERT啟動(dòng)子調(diào)控的canstatin基因重組腺病毒載體AdhTERT-Can。
　　 2、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)重組腺病毒 AdhTERT