雙腺病毒介導的Trail基因治療腫瘤的體外實驗研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁，還剩55頁未讀， 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內容提供方，若內容存在侵權，請進行舉報或認領

文檔簡介

1、該實驗中,以trail分子作為治療分子,以感染效率較高的腺病毒作為載體,對HepG2、Hep3B、Hela和A549等腫瘤細胞和chang liver正常細胞作了誘導凋亡的體外實驗研究.雖然trail分子能夠選擇性地誘導惡性轉化的腫瘤細胞發(fā)生凋亡,但是腺病毒的包裝細胞,293細胞也是一種經轉化的永生型細胞,也有可能在包裝過程中被trail分子誘導發(fā)生凋亡.為避免包裝的中斷,我們同時應用了"GAL4/VP16融合轉錄因子、G5E1b-TA

2、TA啟動子"系統(tǒng)對trail基因的表達進行調控,使其在包裝階段低表達,在感染殺傷階段高表達.該實驗包括以下三部分內容:第一部分 trail基因的克隆、表達載體的構建及對腫瘤細胞體外殺傷效應研究 利用RT-PCR方法從胎兒脾臟組織中擴增出人trail基因的全長cDNA,構建表達載體pcDNA3-trail,先應用脂質體介導的方法轉染HepG2、Hep3B、Hela和A549等腫瘤細胞,同時以pcDNA<,3>轉染同種細胞作為陰性對照.通過

3、MTT法檢測腫瘤細胞相對存活率,初步觀察trail分子對腫瘤細胞的殺傷作用.第二部分 GAL4/VP16融合轉錄因子活性的研究 構建含有融合轉錄因子GAL4/VP16的表達載體pcDNA<,3>-GV和含有受G5E1b-TATA啟動子驅動的報告基因EGFP的表達載體pGL<,3>-G5E1b-TATA-EGFP,應用脂質體介導的方法將這兩種表達載體共轉染HepG2、Hep3B、Hela和A549等腫瘤細胞和293細胞,同時以pGL<,3

4、>-G5E1b-TATA-EGFP單獨轉染上述細胞作為陰性對照,而以pcDNA3-EGFP單獨轉染同種細胞作為陽性對照.第三部分 雙腺病毒系統(tǒng)的構建及對腫瘤細胞和正常細胞體外殺傷效應研究 構建了Adpshuttle-G5E1b-TATA-trail-BGHpA和Adpshuttle-cmv-GV兩種腺病毒載體.以相同的感染復數(shù)共同感染HepG2、Hep3B、Hela和A549等腫瘤細胞和chang liver正常細胞.通過RT-PCR,

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網頁內容里面會有圖紙預覽，若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理，對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容，請與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論