中期保存角膜遠程投送的實驗與臨床研究及在野戰(zhàn)眼庫技術構建中的應用.pdf

1、中期保存角膜遠程投送的實驗與臨床研究及在野戰(zhàn)眼庫技術構建中的應用穿透性角膜移植(PKP)在現(xiàn)代化戰(zhàn)爭眼外傷的救治中具有重要的戰(zhàn)略意義，這對戰(zhàn)爭時期我軍眼庫的儲備能力和機動投送能力提出了更高的要求，需要用野戰(zhàn)眼庫的構建設想來解決。本研究應用國內(nèi)自主研發(fā)的Dx中期保存液作為保存及運輸介質(zhì)，觀察運輸對眼庫角膜內(nèi)皮細胞(CEC)活性的影響，旨在為野戰(zhàn)眼庫構建提供依據(jù)。實驗室研究部分采用搖床模擬運輸過程中的振動刺激，對中期保存的兔角膜施與不同時間

2、和強度的機械振動，應用錐藍一茜素紅活性染色、酶組織化學染色及透射電鏡檢查等手段對模擬運輸后CEC活性進行檢測，并通過動物活體移植了解投送后角膜行PKP術后CEC的活性情況；臨床部分回顧性研究DX中期保存液保存角膜行PKP術臨床病例資料，探討遠程運送對PKP術后效果和角膜內(nèi)皮質(zhì)量是否存在影響。研究表明，實驗設計條件下一定范圍(有效溫度2-6℃，5h持續(xù)加速度1.7m/s<'2>)內(nèi)的機械振動對DX保存角膜內(nèi)皮CEC活性無明顯影響，DX 中

3、期保存液應用于臨床PKP術有較高的成功率，可作為一種經(jīng)濟、簡便、安全有效的角膜保存運輸介質(zhì)，符合構建野戰(zhàn)眼庫的諸要素，能夠以此為基礎構建滿足戰(zhàn)時及平時雙重需要的野戰(zhàn)眼庫。 目的和意義： 1.檢驗角膜DX中期保存液保存效果及遠程投送后應用于角膜移植術的可行性及效果。 2.探討實驗室模擬運輸條件下不同時間及不同強度的機械振動對中期保存兔角膜內(nèi)皮細胞活性的影響。 3.了解上述模擬運輸條件下中期保存的兔角膜用于P

4、KP術的效果以及PKP術后CEC 的存活情況。 4.對角膜DX中期保存液保存后行遠程投送并應用于PKP術的臨床資料進行回顧性研究，對同一眼庫取材保存，本地移植病例及投送至異地移植病例的臨床效果進行對比分析，了解遠程投送對PKP成功率的影響。 5. 以實驗室及臨床研究結果為基礎，為野戰(zhàn)眼庫技術能在平戰(zhàn)時角膜盲治療中的成功應用提供理論及實驗依據(jù)，構建滿足平、戰(zhàn)時雙重需要的戰(zhàn)略角膜儲備庫。 方法： 1.新西蘭大

5、白兔角膜片36枚，中期保存液保存7天，以實驗室用搖床模擬運輸狀態(tài)?？瞻讓φ战M6枚角膜(4℃冰箱保存后直接染色觀察)，余角膜分為2種情況：①以最大設計機械振動強度為定量分組(每組6枚角膜)：按照模擬遠程投送時間1、3、5小時分為3組：②以最大作用時間為定量分組：按機械振動強度Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級分為3組。各組均行錐蘭聯(lián)合茜素紅細胞活性染色計算角膜內(nèi)皮細胞密度、活性率、六角形細胞率等；Na<'+>-K<'+>ATP 酶及琥珀酸脫氫酶酶組織化學染色，

6、圖像分析系統(tǒng)分析計算各組內(nèi)皮細胞兩種酶平均積分光密度值并進行統(tǒng)計學分析；對振動強度最大、時間最長組角膜行透射電鏡觀察，并與對照組相比較，觀察模擬投送是否引起角膜內(nèi)皮細胞超微結構變化。 2.健康成年新西蘭大白兔27只，其中9只(18枚角膜)作為角膜供體，18只作為角膜受體。DX中期保存液保存供體角膜7天，按方法1分組(每組3枚角膜)模擬運輸。角膜移植手術：將不同模擬分組的角膜片進行穿透性角膜移植動物實驗。PKP術后的處理及觀察：每

7、曰肉眼觀察植片變化，記錄角膜透明度、水腫消退時間等，第3、7、10、14、21、30天裂隙燈檢查并照相，A超測量角膜厚度。術后第30天全部處死，取植片進行錐蘭.茜素紅聯(lián)合染色觀察CEC活性。觀察項目：CEC活性密度、活性率、六角形細胞率等。 3.臨床研究采用山東省醫(yī)學科學院眼科研究所所屬青島眼科醫(yī)院、山東省眼科醫(yī)院(濟南)相關病例資料，將2006年DX中期保存液保存角膜行穿透性角膜移植術病例資料按供體角膜是否行遠程投送分為兩組，

8、對手術效果包括術后植片透明度、最佳矯正視力及角膜內(nèi)皮數(shù)量、質(zhì)量如角膜內(nèi)皮細胞密度(CD)、細胞面積變異系數(shù)(CV)和平均細胞面積等指標進行研究，探討遠程運送對PKP術后效果和角膜內(nèi)皮質(zhì)量是否存在影響。 4.根據(jù)現(xiàn)代化高科技戰(zhàn)爭的特點，設計出符合標準的機動性高、戰(zhàn)略儲備功能完善、方法簡便為目標的角膜保存程序、保存設備以及投送方式，從而構建滿足和平、戰(zhàn)時雙重需要的野戰(zhàn)眼庫。 結果： 1.實驗室模擬運輸狀態(tài)下，運輸時間

9、、運輸強度在一定范圍內(nèi)對運輸效果無明顯影響，對照組及各實驗組均保持較高CEC存活率(超過97％)，細胞形態(tài)基本正常，兩種酶在各組角膜內(nèi)皮細胞表達無明顯差異，透射電鏡觀察可見投送組與對照組角膜內(nèi)皮細胞連續(xù)、無脫落，細胞連接緊密，細胞器豐富。 2.實驗室設計模擬運輸后的兔角膜行PKP術，術后觀察各組植片厚度均逐漸減小，術后30天時植片均透明。植片活性染色均可見活性CEC存在。各組PKP術后的植片透明率、厚度以及存活CEC數(shù)量與對照組

10、CEC活性染色結果無明顯差異。 3.臨床資料研究結果表明，在經(jīng)DX中期保存液保存的供體角膜，無論是在青島當?shù)匾嗷蜃郧鄭u運送至濟南，其手術成功率與遠程投送無明顯關系，對角膜移植后恢復等均無明顯影響。 4.經(jīng)動物實驗及臨床資料研究表明，實驗設計條件下一定范圍內(nèi)的機械振動對 DX保存角膜內(nèi)皮CEC活性無明顯影響，DX中期保存液應用于臨床PKP術有較高的成功率，可作為一種經(jīng)濟、簡便、安全有效的角膜保存運輸介質(zhì)，符合構建野戰(zhàn)眼庫的

11、諸要素，能夠以此為基礎構建滿足戰(zhàn)時及和平時期雙重需要的野戰(zhàn)眼庫。 結論： 1.實驗室研究結果表明，用搖床模擬遠程運輸狀態(tài)，可作為角膜遠程投送模型構建的參考方法。一定范圍內(nèi)的機械振動強度及振動時間對DX中期保存液保存兔角膜CEC活性無明顯影響。 2.動物模型結果表明，DX中期保存液保存角膜經(jīng)模擬遠程運輸后應用于PKP術，對PKP術成功率無明顯影響。 3.臨床研究表明，DX液作為保存介質(zhì)行角膜保存及遠程投送可