宮內(nèi)缺氧對(duì)幼年大鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元與學(xué)習(xí)記憶能力的影響機(jī)制.pdf

1、目的:探討宮內(nèi)缺氧幼年大鼠海馬CA3區(qū)乙酰膽堿酯酶(AChE)、突觸體素(SYN)和Jmjd6(Jumonji C domain containing gene6)的表達(dá)變化,從而研究宮內(nèi)缺氧對(duì)幼年大鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元與學(xué)習(xí)記憶能力的影響機(jī)制。
　　 方法:健康SD孕鼠14只,隨機(jī)分為對(duì)照組和缺氧組,分別6只和8只。于孕14 d開(kāi)始將缺氧組的孕鼠置于三氣培養(yǎng)箱(氧濃度:130 mL／L,二氧化碳濃度:0.3 mL／L-0.4

2、mL／L,溫度:25℃,相對(duì)濕度:75％-80％)中缺氧2 h／d,連續(xù)缺氧5 d(孕14 d-18 d),制作胎鼠宮內(nèi)缺氧模型,對(duì)照組不做缺氧處理。產(chǎn)后兩組每窩隨機(jī)選取新生鼠2只飼養(yǎng)至30 d(30日齡)(為平衡每窩新生鼠數(shù)量,其余處死),進(jìn)行為期11 d的Morris水迷宮測(cè)試,記錄探查訓(xùn)練時(shí)幼鼠在目標(biāo)象限的搜索時(shí)間(T1)和對(duì)位探查訓(xùn)練時(shí)幼鼠在目標(biāo)象限的搜索時(shí)間(T2)。水迷宮測(cè)試結(jié)束當(dāng)日,經(jīng)40 g／L甲醛灌注固定、取腦組織,脫

3、水、浸蠟、石蠟包埋、切片(經(jīng)海馬,片厚5 um),行AChE、SYN及Jmjd6免疫組織化學(xué)染色。AChE抗體稀釋度為1:200,SYN抗體稀釋度為1:150,Jmjd6抗體稀釋度為1:80。本實(shí)驗(yàn)免疫組化的主要操作步驟:①脫蠟、水化組織切片。②根據(jù)所應(yīng)用一抗的特殊要求,對(duì)組織切片進(jìn)行預(yù)處理。③3％H2O2去離子水孵育10 min,阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶。PBS沖洗,2 min×3次。④滴加一抗,4℃冰箱過(guò)夜,PBS沖洗,2 min×3次

4、。⑤按照一抗的來(lái)源,分別滴加相應(yīng)的檢測(cè)試劑,37℃孵育30min,PBS沖洗,2 min×3次。⑥:DAB避光顯色5-10 min(顯微鏡下控制顯色時(shí)間)。⑦蒸餾水充分沖洗。⑧切片常規(guī)脫水、透明、封片。每張切片在400倍下用網(wǎng)絡(luò)版數(shù)碼顯微鏡DMBA200對(duì)海馬CA3區(qū)拍照。IPP6-0軟.件圖像分析,記錄各免疫組化陽(yáng)性細(xì)胞的積分光密度(integral opticaldensity,IOD)值。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:兩組之間比較用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。

5、
　　 結(jié)果:Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)顯示缺氧組幼年大鼠探查測(cè)試時(shí)間(T1=18.47±4.41 s)較對(duì)照組幼年大鼠探查測(cè)試時(shí)間(T1=24.38±4.89 s)明顯縮短,并且缺氧組幼年大鼠對(duì)位探查測(cè)試時(shí)間(T2=15.38±6.10 s)較對(duì)照組幼年大鼠對(duì)位探查測(cè)試時(shí)間(T2=22.04±5.57 s)亦明顯縮短,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。免疫組化結(jié)果分別比較對(duì)照組和缺氧組AChE、SYN和Jmjd6陽(yáng)性細(xì)胞的IOD

6、值:缺氧組AChE陽(yáng)性細(xì)胞的IOD值均數(shù)(12.09±1.93)比對(duì)照組均數(shù)(10.36±1.42)大,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05):缺氧組SYN陽(yáng)性細(xì)胞的IOD值均數(shù)(12.51±2.65)比對(duì)照組均數(shù)(17.63±2.53)小,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；缺氧組Jmjd6陽(yáng)性細(xì)胞的IOD值均數(shù)(7.99±1.75)比對(duì)照組均數(shù)(6.24±0.52)大,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論:一定時(shí)間(