紫花苜蓿品種特異性的RAPD分子標(biāo)記.pdf

1、我國(guó)苜蓿種質(zhì)資源豐富，發(fā)展形成了各具特色的品種，以往其鑒定多依賴于形態(tài)學(xué)標(biāo)記等傳統(tǒng)方法；由于DNA分子標(biāo)記直接以遺傳物質(zhì)DNA為研究對(duì)象，它不受環(huán)境因素影響，多態(tài)性高，所以對(duì)苜蓿品種的客觀、快速鑒定有重要意義。 本文以中國(guó)牧草審定委員會(huì)審定登記的四個(gè)紫花苜蓿品種(中苜一號(hào)、肇東苜蓿、甘農(nóng)三號(hào)、公農(nóng)一號(hào))的幼苗單株DNA為研究對(duì)象，采用RAPD標(biāo)記技術(shù)，用群分法和具有品種特異條帶的單株比例分析品種DNA序列間的差異以及差異的穩(wěn)定性

2、。試圖獲得可以區(qū)分四個(gè)供試紫花苜蓿品種的特異性RAPD標(biāo)記。 結(jié)果如下：1.采用CTAB法提取基因組DNA，得到純度高、完整性好的基因組DNA。 2.通過設(shè)置退火溫度梯度，得到適宜RAPD技術(shù)進(jìn)行品種鑒定的退火溫度。 3.通過對(duì)RAPD反應(yīng)體系中的反應(yīng)物逐一設(shè)置梯度，得到優(yōu)化的適宜進(jìn)行品種鑒定的RAPD體系。采用該反應(yīng)體系，在反應(yīng)體系中各種試劑來源、濃度保持一致的前提下，嚴(yán)格按照反應(yīng)程序中各個(gè)環(huán)節(jié)的要求操作，RA

3、PD技術(shù)表現(xiàn)出良好的穩(wěn)定性和可重復(fù)性。 4對(duì)120-條RAPD隨機(jī)引物經(jīng)過初步篩選和重復(fù)篩選，共有34條引物產(chǎn)生多態(tài)性條帶，其中S1,S78,S89,S91,S115等5條引物能夠擴(kuò)增出明顯的品種特異性條帶，或者帶譜中出現(xiàn)特異性條帶的缺失。這些特異性條帶(包括缺失條帶)可以作為品種鑒定的特異性標(biāo)記。 5本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用篩選出的RAPD標(biāo)記引物對(duì)各供試品種單株DNA的擴(kuò)增結(jié)果表明，篩選出的RAPD標(biāo)記引物對(duì)各品種單株擴(kuò)增，擴(kuò)增后