腺病毒介導rhBMP-2轉(zhuǎn)染兔BMSCs聯(lián)合同種異體DBM構(gòu)建復合材料的生物安全性研究.pdf

1、目的：腺病毒重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2(Ad-rhBMP-2)轉(zhuǎn)染兔骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)復合同種異體脫鈣骨基質(zhì)構(gòu)建復合材料的生物相容性觀察。
　　方法：復蘇保存于液氮罐中的骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)，取相同代數(shù)細胞運用腺病毒重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2(Ad-rhBMP-2)進行轉(zhuǎn)染，進行轉(zhuǎn)染后免疫組化觀察轉(zhuǎn)染后骨髓間充質(zhì)干細胞內(nèi)骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2(BMP-2)表達情況。BMSCs轉(zhuǎn)染48h后與同種異體骨脫鈣骨基質(zhì)復合，掃

2、描電鏡觀察脫鈣骨基質(zhì)上細胞生長、貼附情況，MTT法檢測細胞增殖情況。
　　結(jié)果：腺病毒轉(zhuǎn)染48h后，BMSCs在熒光顯微鏡觀察下，轉(zhuǎn)染后的細胞狀態(tài)較好，鏡下可見綠色熒光表達，肉眼觀察轉(zhuǎn)染效率達到95％以上，免疫組化實驗檢測結(jié)果表明（Ad-rhBMP-2）轉(zhuǎn)染后棕黃色顆粒性染色可以在細胞胞漿中觀察到，呈陽性表達，未轉(zhuǎn)染細胞內(nèi)BMP-2蛋白含量較少。細胞復合同種異體骨脫鈣骨基質(zhì)體外培養(yǎng)48h后，倒置顯微鏡下可見脫鈣骨基質(zhì)材料具有良好孔

3、隙與三維結(jié)構(gòu)，熒光顯微鏡下Ad-EGFP轉(zhuǎn)染細胞與脫鈣骨基質(zhì)復合組可觀察到支架材料上細胞正常生長發(fā)出明亮綠色熒光。細胞計數(shù)法檢測，細胞與脫鈣骨基質(zhì)復合6h后，細胞粘附率約（70±3.7）％;復合12h后粘附率為（77±4.6）％;復合24h后粘附率為（80±3.8）％。掃描電鏡下觀察可見脫鈣骨基質(zhì)呈現(xiàn)疏松多孔結(jié)構(gòu)，孔徑大小不一，形狀不規(guī)則并相互交通。脫鈣骨基質(zhì)的孔隙直徑為215±86μm，孔隙率達76±3.51％。體外培養(yǎng)7天后掃描電鏡