熒光實時PCR檢測肺癌患者EGFR基因突變方法的建立及其評價.pdf

1、目的:探討SCC、NSE、CEA、CYFRA21-1四項腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測對肺癌的診斷價值。采用循證醫(yī)學(xué)的方法，應(yīng)用Meta分析軟件對國內(nèi)外已發(fā)表的高質(zhì)量的關(guān)于中國大陸非小細(xì)胞肺癌患者EGFR基因突變與患者特征關(guān)系的文獻進行綜合定量分析。TaqMan-MGB探針熒光實時PCR快速檢測肺癌組織及全血EGFR基因突變，從而建立一種新的腫瘤標(biāo)志物篩查方法，為臨床篩選靶向治療有效的患者提供證據(jù)，同時探討EGFR基因突變與其他腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測對

2、不同病理類型肺癌診斷的應(yīng)用價值。 方法:（1）采用化學(xué)發(fā)光法對肺癌組132例、肺良性疾病組48例和正常對照組92例的血清SCC、NSE、CEA、CYFRA21-1四項腫瘤標(biāo)志物進行檢測及統(tǒng)計分析。（2）收集2004年～2008年已公開發(fā)表的關(guān)于中國大陸非小細(xì)胞肺癌患者EGFR基因突變臨床研究文獻，對符合條件的研究結(jié)果進行Meta分析。（3）自行設(shè)計探針及引物，應(yīng)用TaqMan-MGB探針熒光實時PCR檢測37例肺癌組織及其抗凝全

3、血、24例肺良性疾病抗凝全血及12例健康體檢者抗凝全血的EGFR基因突變情況，分析EGFR基因突變與患者臨床特征的關(guān)系，并評價EGFR基因突變與其他腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測對不同病理類型肺癌診斷的應(yīng)用價值。 結(jié)果:（1）NSE、CEA、CYFRA21-1肺癌組顯著高于肺良性疾病組和正常對照組，SCC肺癌組高于正常對照組，CEA和CYFRA21-1肺良性疾病組顯著性高于正常對照組。CEA在肺腺癌中的水平較高，NSE在小細(xì)胞肺癌中的水平較

4、高，而SCC、CYFRA21-1在肺鱗癌中的水平較高。CEA在Ⅲ/Ⅳ期肺癌中高于Ⅰ/Ⅱ期，在轉(zhuǎn)移性肺癌中高于未發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移者。單項腫瘤標(biāo)志物在肺癌診斷中敏感性：NSE>CEA>CYFRA21-1>SCC，在腺癌中CEA敏感性最高（58．8％），鱗癌中CYFRA21-1敏感性最高（71．4％），小細(xì)胞肺癌中NSE敏感性最高（50％）。NSE、CEA、CYFRA21-1的ROC曲線下面積分別為0．928±0．034、0．957±0．026、0．

5、964±0．023，顯示診斷準(zhǔn)確性較高，相對來說CYFRA21-1的診斷價值高于其他二種。SCC曲線下面積雖然大于0．5，但沒有統(tǒng)計學(xué)意義。腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測，可以提高診斷試驗的敏感性，在肺癌診斷中NSE、CEA、CYFRA21-1組合敏感性最高（75．6％），特異性也較好（90．7％）；腺癌診斷中SCC、NSE、CEA組合敏感性最高（73．5％），鱗癌診斷中NSE、CEA、CYFRA21-1組合敏感性最高（87．5％），小細(xì)胞肺癌中S

6、CC、NSE、CYFRA21-1組合敏感性最高（75．0％）。（2）符合納入標(biāo)準(zhǔn)的共11項研究，總樣本量949例，EGFR總突變率為28．7％。女性、不吸煙、腺癌患者突變率顯著高于男性、吸煙者、非腺癌患者（P<0．01）。（3）熒光實時PCR檢測肺癌組織及其全血EGFR基因突變19例均陽性，17例均陰性，1例肺癌組織EGFR基因突變檢測結(jié)果陰性，而其血清檢測結(jié)果陽性；肺正常組織EGFR基因突變檢測均陰性。在37例肺癌全血樣本中，共檢測到

7、EGFR基因突變20例，小細(xì)胞肺癌中EGFR基因突變0例，非小細(xì)胞肺癌中EGFR基因突變的突變率為55．6％，肺良性疾病組和正常對照組中EGFR突變率為0％。女性、不吸煙和肺腺癌患者EGFR基因突變率顯著高于男性、吸煙和非腺癌患者，其中以女性不吸煙腺癌患者突變率最高（85．7％）。此外，EGFR基因突變與患者年齡、疾病的TNM分期、化療與否及轉(zhuǎn)移情況等均無明顯的相關(guān)性。EGFR基因突變的敏感性和特異性均優(yōu)于其他四項腫瘤標(biāo)志物，EGFR基

8、因突變與其他腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測可以明顯提高診斷的敏感性，在肺癌診斷中NSE、CEA、CYFRA21-1、EGFR突變組合敏感性達到了86．5％，其特異性較好，約登指數(shù)為0．8；EGFR基因突變與其他腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測還可以提高非小細(xì)胞肺癌中不同病理類型診斷的敏感性，CEA、EGFR突變二項聯(lián)合檢測診斷腺癌的敏感性就高達95％，NSE、CEA、CYFRA21-1、EGFR突變聯(lián)合檢測診斷鱗癌的敏感性也達到了86．7％。 結(jié)論:腫瘤

9、標(biāo)志物SCC、NSE、CEA、CYFRA21-1對肺癌的診斷都有一定意義，不同病理類型各有特點，選擇合適的組合檢測有利于肺癌的鑒別診斷。EGFR基因突變主要存在于女性、非吸煙和腺癌患者中，可將EGFR基因突變作為篩查靶向治療有效的患者的敏感指標(biāo)，同時作為肺癌篩查的一種新的腫瘤標(biāo)志物。TaqMan-MGB探針熒光實時PCR可有效地檢測外周血循環(huán)游離DNA的EGFR基因突變，操作簡便，易于臨床推廣。EGFR基因突變對肺癌的綜合檢測性能優(yōu)于其