Trpc6對胃癌增殖及放療增敏的研究.pdf

1、目的：①檢測人胃癌組織及癌旁正常組織中Trpc6蛋白的表達，研究它與胃癌的關(guān)系。②探討Trpc6對胃癌AGS細胞生長和細胞周期的影響及其可能機制。③探討Trpc6通道在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用。④探討Trp阻斷劑SKF96365對腫瘤細胞AGS放療增敏的影響。⑤探討TRPC6通道在胃癌放療增敏的作用。 方法：⑴應(yīng)用Western blot檢測胃癌組織及癌旁正常組織中通道蛋白的表達。⑵采用細胞計數(shù)和流式細胞儀的方法了解Trp阻斷劑SK

2、F96365阻斷Trp后對AGS細胞增生的影響。⑶用10只BALB/c裸鼠，隨機分為GFP、DN-Trpc6兩組，每組5只。對照組裸鼠均皮下注射病毒轉(zhuǎn)染GFP(Ad-GFP)的胃癌AGS細胞1×106/只，治療組裸鼠均皮下注射病毒轉(zhuǎn)染DNC6(Ad-DNC6)的胃癌AGS細胞1×106/只，觀察裸鼠的一般情況，每周測量兩次腫瘤的體積，在第10周處死裸鼠，測量腫瘤的體積和重量。⑷采用流式細胞儀的方法了解Trp阻斷劑SKF96365對AGS

3、細胞周期的影響；根據(jù)流式細胞儀的結(jié)果，在5μM SKF96365作用8小時后對AGS細胞進行放療，計算SF2、細胞生存曲線、D0值、Dq值、SF2的放療增敏率、D0的放療增敏率、Dq的放療增敏率。⑸用20只BALB/c裸鼠，隨機分為4組，分別是：對照組、SKF96365組、單純放療組和SKF96365聯(lián)合放療組，每組5只。四組裸鼠均皮下注射AGS胃癌細胞1×106/只。對照組在皮下注射腫瘤細胞后第5天開始每天腹腔注入100ul的生理鹽水

4、；SKF96365組和放療聯(lián)合SKF96365組在皮下注射腫瘤細胞后第5天開始每天腹腔注射SKF9636520mg/Kg，共7天；單純放療組和SKF96365聯(lián)合放療組在皮下注瘤后第7天開始進行放療，電子線7Mev，2Gy/天，共5天。觀察裸鼠的一般情況，每周測量兩次腫瘤的體積，計算各組腫瘤體積到達0.4cm3的時間，計算GD值和EF值，在第12周處死裸鼠，測量腫瘤的體積和重量。 結(jié)果：①16對正常和胃癌配對標(biāo)本組織中，均有Tr

5、pc6蛋白的表達，其中6對胃癌組織TRPC6表達高于癌旁正常組織。②Trp阻斷劑SKF96365呈時間依賴的方式阻滯AGS細胞的增生。③兩組裸鼠一般情況無差異性變化；在注射第2、4、8周，對照組和治療組腫瘤體積為(mm3)：89.3±39.6 versus37.4±12.8(P<0.01):388.8±116.4 versus95.8±53.9(P<0.01)；788.9±181.8 versus159.7±87.5(P<0.01)；對

6、照組和治療組腫瘤重量為0.72±0.12g versus0.41±0.19g(P<0.01)。④AGS細胞的貼壁率(plate efficiency PE)是32％；與對照組相比SKF96365組的克隆形成率是0.99；單純放療組的SF2是0.39，SKF96365+放射組的SF2是0.21；根據(jù)SF2所得到的放療增敏率是1.85；放射+SKF96365組的D0值小于單純照射組(1.15 Gy vs1.49 Gy)；根據(jù)D0值求出的增強

7、比為1.30；放射+SKF96365組的Dq值小于單純照射組(1.04Gy vs1.93 Gy)；根據(jù)Dq值求出的增強比為1.84。⑤裸鼠一般情況無差異性變化；在治療后第12周，對照組、SKF96365組、單純放療組和SKF96365聯(lián)合放療組腫瘤體積為：1532±245.3mm3、1123±115.2mm3、889±89.8mm3、426±68.6mm3；對照組腫瘤平均體積從0.1cm3生長至0.4cm3時所需天數(shù)為43天；單純照射組

8、腫瘤生長延緩時間(GDRT)為12天；單純SKF96365組的GD SKF為19天；SKF96365+照射組的GD SKF+RT為39天；放射增敏因子EF=1.67。單純放療組和SKF96365聯(lián)合放療組腫瘤重量為1.4±0.45g versus0.6±0.26g；各組參數(shù)經(jīng)T檢驗分析(P<0.05)。 結(jié)論：⑴Trpc6通道蛋白的過表達可能與胃癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。⑵Trpc6通道參與細胞增生和細胞周期的調(diào)節(jié)，其可能機制是調(diào)節(jié)pc