胚胎鼠視網(wǎng)膜干細胞體外培養(yǎng)和移植的研究.pdf

1、視網(wǎng)膜作為神經(jīng)組織的延伸，損傷后不能再自我修復，僅代以神經(jīng)膠質(zhì)，功能完全喪失，因此視網(wǎng)膜疾病的治療尤為棘手。隨著干細胞的研究不斷深入，期望能夠?qū)⒁暰W(wǎng)膜干細胞在體外進行培養(yǎng)擴增并且移植回體內(nèi)，以修復受損的視網(wǎng)膜組織。 目的：探討體外分離、培養(yǎng)和擴增SD大鼠胚胎鼠的視網(wǎng)膜干細胞的方法。探討成年SD大鼠視網(wǎng)膜損傷模型建立的方法。研究用5-溴脫氧尿嘧啶（5-Brdu）標記視網(wǎng)膜干細胞的方法。探討SD大鼠胚胎鼠的視網(wǎng)膜干細胞的移植，對術(shù)后

2、移植區(qū)的形態(tài)學觀察。 材料和方法：取20只SD大鼠胚胎鼠的視網(wǎng)膜組織，采用酶消化的方法獲得單個細胞，在干細胞選擇性培養(yǎng)基中培養(yǎng)，觀察原代和傳代細胞的生長狀況，并用免疫細胞化學的方法來檢測巢蛋白（NESTIN）的表達。應(yīng)用視神經(jīng)鉗夾的方式對成年SD大鼠的制作視網(wǎng)膜損傷模型。5-Brdu標記一代細胞，通過玻璃體腔注射入損傷模型眼，2周后摘除眼球進行光鏡觀察。 結(jié)果：SD大鼠胚胎鼠的視網(wǎng)膜干細胞在體外懸浮生長成致密的球形細胞團

3、，傳代后也能夠生成新的細胞團，原代和傳代細胞NESTIN蛋白均表達陽性。視神經(jīng)鉗夾方法制作的視網(wǎng)膜損傷模型，經(jīng)電生理（ERG）檢測以后ab波波峰均有下降，且光鏡下觀察視網(wǎng)膜各層細胞數(shù)量減少，結(jié)構(gòu)破壞，證明模型制作成功。將標記有5-Brdu的一代細胞移植模型眼后，光鏡下可見移植細胞整合入視網(wǎng)膜組織。 結(jié)論：SD大鼠胚胎鼠的視網(wǎng)膜干細胞可以進行體外培養(yǎng)和擴增，通過玻璃體腔注射的方法移植入視網(wǎng)膜損傷的眼中。移植2周后的細胞存活并且整合