自體角膜緣干細胞體外培養(yǎng)后移植的臨床研究.pdf

1、目的：建立人角膜緣干細胞體外培養(yǎng)模型；探討單眼角膜緣干細胞缺陷患者自體角膜緣干細胞體外培養(yǎng)后再移植的臨床療效。 方法：從角膜移植存留的環(huán)狀角膜緣組織上分離含有完整上皮細胞的2mm×2mm、厚約0.2mm的組織塊數塊，每個組織塊剪切成4個1mm×1mm小組織塊，經消化酶處理后置于無上皮細胞的人羊膜上采用含有20％胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，共14天，隔日換液，每日使用倒置顯微鏡觀察細胞生長情況，分別于第7、14天進行

2、病理組織學和抗增殖細胞核單克隆抗體和廣譜角蛋白抗體免疫組織化學檢查。自單眼角膜緣干細胞缺陷患者的健眼上獲取的2mm×2mm角膜緣組織塊在體外以上述方法進行培養(yǎng)，待細胞形成多層時進行患眼自體移植，術后定期觀察患者視力、角膜新生血管、角膜上皮完整性、角膜透明度。 結果：角膜緣組織塊體外培養(yǎng)24小時開始貼壁，48小時可見細胞自組織塊邊緣爬行至羊膜上，此后細胞快速生長，至1周時，擴增的角膜緣上皮細胞出現匯合并牢固貼附于羊膜之上，2周時可

3、形成4～5層。所培養(yǎng)細胞在第7、14天均對廣譜角蛋白抗體和增殖細胞核抗原單克隆抗體呈陽性反應。單眼角膜緣干細胞缺陷患者自體角膜緣干細胞體外培養(yǎng)后再移植術后患者視力均有提高，角膜上皮細胞修復良好，角膜新生血管得到抑制，角膜透明度明顯增加。 結論：以羊膜為底物的消化加組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)的角膜緣上皮細胞既具有較高的增殖能力、短期內可形成多層，又可保持角膜上皮細胞的特性，所形成的細胞片可用于角膜緣干細胞缺陷患者。單眼角膜緣干細胞缺陷患者自