B淋巴細胞刺激因子（BlyS）誘導的抗腫瘤作用的實驗研究.pdf

1、四川大學博士學位論文B淋巴細胞刺激因子（BlyS）誘導的抗腫瘤作用的實驗研究姓名：傅春華申請學位級別：博士專業(yè)：腫瘤學指導教師：魏于全20040420四川大學博士學位論文鼠結腸癌細胞系CT26和Lewis肺癌細胞系LL2，通過Zeosin抗性篩選獲得單克隆腫瘤細胞株。提取細胞總RNA做半定量RTPCR，鑒定出高表達msBlyS的穩(wěn)定細胞克隆，進一步做westernblot鑒定和生物活性測定。(3)將高分泌msBlyS的腫瘤細胞(msBl

2、yStumor)接種到實驗小鼠皮下，觀察基因修飾后的腫瘤細胞自身的成瘤性觀察未成瘤免疫小鼠再次接種野生型腫瘤細胞后，能否產(chǎn)生保護性免疫反應通過EL工SA免疫印跡，免疫熒光等手段檢測有無抗腫瘤自身抗體的產(chǎn)生淋巴細胞阻斷實驗過繼免疫實驗等探討抗腫瘤作用的機理。結果:(1)測得的msBlyScDNA序列與基因文庫中報道序列完全相同，插入相位正確，未改變目的基因的閱讀框架。(2)轉染后得到8個CT26單克隆抗性腫瘤細胞株，其中有5個經(jīng)RTPCR

3、擴增出msBlyS目的條帶9個LL2單克隆抗性腫瘤細胞株，其中有7個經(jīng)RTPCR擴增出msBlyS目的條帶。Westernblot顯示該克隆株細胞裂解物可與抗msBlyS的抗體結合，在雜交膜上形成一條與預期蛋白分子量一致的條帶。生物活性測定顯示細胞分泌上清可共刺激體外培養(yǎng)的B淋巴細胞增殖，(3)msBlyS修飾的腫瘤細胞成瘤性顯著降低，尤其是msBlyS修飾的小鼠LewisA$癌細胞(msBlySLL2)荷瘤小鼠的腫瘤生長明顯減緩，生存