高糖和胰島素對鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?研究高糖和胰島素對鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(marrow mesenchymal stem cells，MSCs)增殖的影響并從細(xì)胞周期和凋亡的角度對其機(jī)制做初步探討。
　　 實(shí)驗(yàn)方法:取8周齡小鼠股骨骨髓細(xì)胞，用Percoll淋巴細(xì)胞分離液分離獲得MSCs，培養(yǎng)至70%-80%融合。首先用流式細(xì)胞儀檢測其表面抗原陽性率，結(jié)合形態(tài)學(xué)表現(xiàn)鑒定其純度，純度達(dá)標(biāo)者分組測試。設(shè)立不同的葡萄糖濃度組（5.6mmol/L、11mmol/

2、L和25mmol/L），并在11mmol/L和25mmol/L葡萄糖濃度組下設(shè)立胰島素濃度梯度組（0μU/mL I、15μU/mL、30μU/mL和200μU/mL），干預(yù)MSCs72小時，檢測下述指標(biāo)：(1)增殖情況：用MTT法測定。(2)細(xì)胞周期：用流式細(xì)胞術(shù)測定。(3)細(xì)胞凋亡率：用AnnexinV聯(lián)合PI法測定。采用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，組間比較采用LSD檢驗(yàn)。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果:成功分離到MSCs

3、并鑒定其純度大于90%。用單純葡萄糖干預(yù)MSCs72小時后，發(fā)現(xiàn)其雙向影響MSCs增殖（P=0.003），即中等濃度的葡萄糖(11mmol/L)明顯增加了MSCs的增殖率，但過高濃度時此作用消失；高濃度葡萄糖明顯增加了細(xì)胞周期S期百分比（P=0.002）和細(xì)胞凋亡率（P=0.000）。在MHG組和EHG組中，胰島素亦雙向影響MSCs增殖（P=0.000，P=0.004），即生理濃度的胰島素(15mmol/L)明顯增加了MSCs的增殖率，