人參CLASSⅢ幾丁質酶基因克隆、序列分析及原核表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本文以人參為材料，首次從中克隆了ClassⅢ幾丁質酶基因，并進行了序列分析，研究了該基因在大腸桿菌中的表達情況，其主要結果如下： 1.通過RT-PCR與反向PCR方法，從人參中克隆到一個ClassⅢ幾丁質酶基因，并進行測序，全長為1432bp，其中包含完整的開放閱讀框即從第272位的起始密碼子到第1169位的終止密碼子，推測編碼蛋白的氨基酸序列含298個氨基酸殘基，無內含子，并在GenBank上注冊(DQ532359)；

2、 2.人參ClassⅢ幾丁質酶基因與其它植物ClassⅢ幾丁質酶基因在核苷酸和氨基酸水平上有很高同源性；通過對人參ClassⅢ幾丁質酶基因的系統(tǒng)發(fā)育樹分析得出，人參ClassⅢ幾丁質酶和其它植物的ClassⅢ幾丁質酶具有共同的起源；ClassⅠ、ClassⅡ和ClassⅣ幾丁質酶來源于同一祖先，而ClassⅢ與ClassⅤ幾丁質酶來源于同一祖先。3.人參ClassⅢ幾丁質酶基因編碼一酸性幾丁質酶，等電點pI為4.55，預測分子量為31.

3、4KD；人參ClassⅢ幾丁質酶氨基酸序列含有兩個功能區(qū)域即N-端信號肽區(qū)和糖基水解酶18家族催化區(qū)；人參ClassⅢ幾丁質酶蛋白的催化區(qū)內，144-152為幾丁質酶18家族的活性位點，序列為LDGVDFDIE，活性中心為E(Glu)；人參ClassⅢ幾丁質酶蛋白的成熟位點在第25-26的Ala-Gly之間； 4.用同源建模法模擬出人參ClassⅢ幾丁質酶的空間結構模型； 5.將人參ClassⅢ幾丁質酶基因亞克隆到大腸桿

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