濾泡輔助性T細胞參與實驗性自身免疫性腦脊髓炎的初步研究.pdf

1、研究背景：
　　多發(fā)性硬化(multiple sclerosis,MS)是一種以中樞神經系統(tǒng)(central nervous system,CNS)白質炎性脫髓鞘為病變特征的自身免疫性疾病,確切病因和發(fā)病機制尚不明確。傳統(tǒng)的免疫學觀點認為細胞免疫在該病的發(fā)生中具有關鍵作用,但近年來B細胞介導的體液免疫逐漸成為MS研究的熱點,來自動物實驗、尸檢研究、外周血和腦脊液(cerebrospinal fluid,CSF)細胞分析、以及臨床B

2、細胞去除治療的諸多證據均支持了B細胞免疫及抗體在MS發(fā)病中的重要作用,但在MS中B細胞是如何活化及其調控機制尚不完全清楚。新近研究表明,濾泡輔助性T細胞(T follicular helper cells,Tfh)是一群表型為CD4+CXCR5+的T細胞亞群,可輔助B細胞活化、增殖、分化并形成生發(fā)中心(germinal center,GC)。Tfh細胞作為B細胞活化的真正輔助者,其發(fā)現被認為是T-B細胞協(xié)作研究的重大突破[1],疾病狀態(tài)

3、下Tfh細胞的功能變化已成為當前相關研究的熱點之一。實驗性自身免疫性腦脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)作為MS的經典動物模型,Tfh細胞及與B細胞相互作用對該自身免疫性疾病的影響如何同樣有待深入探討。
　　目的：
　　建立并評估 EAE小鼠模型;觀察 EAE小鼠脾臟生發(fā)中心以及脊髓異位淋巴濾泡樣結構的形成;探討Tfh細胞、B細胞及其細胞亞群在不同病程時期EA

4、E小鼠外周免疫器官和病變靶器官中的比率變化,以期提供Tfh細胞參與EAE疾病過程的初步證據。
　　方法：
　　用髓鞘少突膠質細胞糖蛋白35-55（myelin oligodendroglia glycol protein,MOG35-55)多肽誘導C57BL/6小鼠,建立EAE動物模型;用蘇木素-伊紅(hematoxylin and eosin,HE)染色和勞克堅牢藍(Luxol fast blue,LFB)染色評估EAE發(fā)

5、病小鼠脊髓組織中的病理學改變;利用多重免疫熒光染色方法觀察EAE小鼠脾臟中生發(fā)中心的形成以及免疫細胞的位置變化,在脊髓組織中尋找異位淋巴濾泡樣結構;借助流式細胞檢測方法觀察不同病程時期EAE小鼠脾臟、淋巴結及脊髓中Tfh細胞與B細胞及其細胞亞群的比率變化,探討其與EAE疾病變化的關系。
　　結果：
　　MOG35-55多肽免疫小鼠最早于免疫后第11天開始起病,發(fā)病主要集中在免疫后第12-16天,于發(fā)病后4.25±0.74天達

6、到疾病高峰,總體發(fā)病率在90％左右。患病小鼠主要表現為不同程度的肢體癱瘓,并以雙后肢為主。HE染色顯示在 EAE小鼠脊髓組織切片中有大量炎癥細胞浸潤,主要分布在血管周圍和脊膜處。LFB染色顯示在EAE小鼠脊髓炎性病灶內可見多個髓鞘脫失區(qū)。多重免疫熒光染色發(fā)現EAE小鼠脾臟中生發(fā)中心形成并伴有T細胞、B細胞、濾泡樹突狀細胞(follicular dendritic cells,FDC)的位置變化;在EAE小鼠脊髓組織中發(fā)現了異位的淋巴濾泡

7、樣結構。與此同時,我們在EAE小鼠脾臟和脊髓組織中觀察到了大量的CD4+CXCR5+ICOS+和CD4+CXCR5+PD-1+Tfh細胞。流式細胞術檢測顯示,在EAE發(fā)病前期、高峰期、緩解期以及慢性持續(xù)期小鼠脾臟、淋巴結和脊髓組織中 Tfh細胞比率均顯著增高,與正常對照組比較有統(tǒng)計學意義(P<0.05),其中尤以疾病高峰期的升高幅度最大。Tfh細胞亞型分析顯示,在EAE小鼠病程中,Th1樣Tfh細胞比率下降,而Th2樣、Th17樣Tfh

8、細胞比率升高。與Tfh細胞變化趨勢相似,在EAE病程的對應時間點,患病小鼠脾臟、淋巴結以及脊髓組織中的B細胞亞型均較正常對照組顯著升高(P<0.05)。
　　結論：EAE導致了小鼠脾臟中生發(fā)中心的形成,同時伴隨不同類型免疫細胞的位置遷移,并在 EAE病變靶器官脊髓組織中形成了異位的淋巴濾泡樣結構,且 EAE不同病程時期小鼠外周免疫器官和病變靶器官中Tfh細胞及B細胞亞型比率始終處于較高水平,這些結果為Tfh細胞參與EAE疾病過程提