靶向MDR1基因的小分子干擾RNA治療卵巢癌的動物體內(nèi)研究.pdf

1、目的：
　　 本實驗使用脂質體轉染靶向MDRl基因的小分子干擾RNA作用于卵巢癌腹水瘤模型中P-gp的過度表達,進一步證實靶向MDR1基因的小分子干擾RNA體內(nèi)抑制MDR1與P糖蛋白表達的效果以及對腫瘤生長的影響。
　　 方法：
　　 1.使用熒光標記的siRNA檢測siRNA的轉染效率,優(yōu)化轉染條件。
　　 2.設計靶向MDR1基因的三條siRNA/MDR1,并用脂質體分別轉染到卵巢癌SKOV3/AR細

2、胞中,轉染48小時后使用RT-PCR檢測MDR1 mRNA的表達,篩選出干擾效率較高的一條siRNA。
　　 3.通過注射人卵巢癌細胞SKOV3/AR到裸鼠腹腔建立腹水瘤模型；待裸鼠長有腹水,然后把荷瘤鼠隨機分為以下三個治療組(6只/組):泰素治療組(空白組),泰素和脂質體治療組(對照組),泰素和小分子RNA干擾治療組(治療組),三組均為腹腔注射治療。治療過程中,每周稱量老鼠體重兩次,以此評價治療的毒性反應。
　　 4.

3、觀察各組老鼠的腫瘤和腹水生長情況,并分別用半定量PCR和免疫組織化學染色法測定治療后腫瘤組織中MDR1和P糖蛋白的表達情況。
　　 結果：
　　 1.通過圖像軟件分析熒光顯微鏡照片顯示:當干擾片段濃度為30nM時,siRNA轉染效率最高。
　　 2.轉染48小時后各組細胞MDRl表達水平:MDR1mRNA在siRNA/MDR1-Ⅰ組、siRNA/MDR1-Ⅱ組、siRNA/MDR1-Ⅲ組、空白組、脂質體組及陰性對

4、照組細胞的表達水平依次為1.98±0.03,2.05±0.09,1.45±0.08,3.49±0.28,3.46±0.17和3.48±0.26；同空白組相比,siRNA干擾組MDR1mRNA的表達水平均有顯著下降(均有P<0.05),其中以siRNA/MDR1-Ⅲ組的下降最明顯,因此選擇對基因抑制率最高的siRNA/MDR1-Ⅲ進行后續(xù)治療實驗。
　　 3.接種細胞20天后,裸鼠被發(fā)現(xiàn)有腹水。治療結束后,我們發(fā)現(xiàn)siRNA治療無

5、明顯毒性反應,且泰素和小分子干擾RNA治療組老鼠的腫瘤及腹水生長與其他組相比明顯受到抑制,分別下降了43.6％和29.7％(P<0.001)；泰素和小分子干擾RNA治療組腫瘤組織中MDR1和P糖蛋白的表達與其他組相比也明顯受到抑制(P<0.001)。
　　 結論：
　　 靶向MDR1基因的小分子干擾RNA能夠在體內(nèi)有效而特異性地抑制MDR1及P糖蛋白的表達和卵巢癌的生長；小分子RNA干擾技術有可能成為卵巢癌基因治療的一種