重組人Ⅱ型膠原250-270多肽的基因構建和表達的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、主要研究內容如下:該文為高效表達rhCⅡ250-270.在基因構建時,就采取了一些方法對目的基因進行優(yōu)化.采用E.coli偏愛密碼子,通過化學合成和PCR技術,構建rhCⅡ250-270的目的基因,并重組到pUC19質粒中,測序結果證實目的基因序列與設計的完全相同;利用同裂酶BamHⅠ和BglⅡ相同的粘性末端,將單聚目的基因片段在重組質粒上依次串聯(lián)成多聚目的基因,測序結果證實多聚目的基因序列與預期的相符. 在表達研究中,通過比較rbCⅡ

2、250-270在不同類型的表達載體上及不同E.coli宿主菌中的表達量,發(fā)現(xiàn)以非融合方式表達時,無論是化學誘導(PKKH)或溫控誘導(pBV220),在不同宿主菌中表達量都很低,且表達產物的可溶性很差;以融合方式表達(pGEX-4T-1和pGEX-4T-3)時,表達量明顯提高,表達產物的可溶性較好,但在不同宿主菌中的差異很大.選擇融合表達的BL21工程菌進行表達條件的優(yōu)化研究,發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)溫度對表達量的影響最大,在優(yōu)化的條件進行表達下,SD

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