農(nóng)達（41％草甘膦）對人L-02肝細胞損傷的研究.pdf

1、目的： 探討農(nóng)達(41％草甘膦)對人L-02肝細胞產(chǎn)生的損傷作用及其可能的機制。 方法： 體外試驗(in vitro test)以L-02肝細胞為受試細胞，通過MTT法檢測不同濃度的農(nóng)達對L-02肝細胞存活率的影響，選擇細胞存活率為20％-80％的濃度進行后續(xù)實驗。設(shè)置5個農(nóng)達處理組，60mg/L、90mg/L、120mg/L、150mg/L、180mg/L和1個陰性對照組(PBS)，農(nóng)達處理細胞時間為24h。L

2、-02肝細胞的形態(tài)學(xué)改變采用姬母薩染色法在光鏡下觀察結(jié)合透射電鏡觀察；農(nóng)達對L-02肝細胞膜通透性影響和細胞毒性作用采用谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)活性水平結(jié)合臺盼藍拒染法來評價；農(nóng)達誘導(dǎo)L-02肝細胞氧化損傷程度選用超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量等指標(biāo)評價；用線粒體跨膜電位(△ψm)檢測細胞線粒體損傷；用DNA條帶(DNA-Ladder)檢測肝細胞DNA損傷；以Annexin V-FI

3、TC/PI復(fù)染法測定細胞發(fā)生凋亡和壞死的情況；Western Blotting檢測對照組與90mg/L組細胞色素C(Cyt C)和凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)表達水平。 結(jié)果： 1.在60-180mg/L的處理濃度范圍內(nèi)，能明顯引起L-02肝細胞存活率的降低(P<0.05)，處理濃度和細胞存活率之間存在負相關(guān)(r=-0.974)。 2.在光鏡下觀察姬母薩染色L-02肝細胞爬片，觀察到各農(nóng)達處理組L-02肝細胞皺縮或腫大

4、，形態(tài)由瓦片狀收縮為圓形，細胞間隙擴大，細胞破裂，染色質(zhì)濃縮，貼壁細胞密度和數(shù)量減少。電鏡下觀察，可發(fā)現(xiàn)處理組細胞出現(xiàn)表面微絨毛消失，細胞膜結(jié)構(gòu)不完整，細胞核碎裂或腫脹，線粒體空泡樣變等細胞凋亡或壞死的表現(xiàn)。 3.農(nóng)達處理L-02肝細胞，其活細胞臺盼蘭藍染比例升高(P<0.05)；細胞培養(yǎng)上清液中ALT活性增加(P<0.05)；從90mg/L組開始AST活性增加(P<0.05)；農(nóng)達導(dǎo)致處理組細胞內(nèi)MDA的含量增加，SOD活性減

5、弱，GSH含量減少(P<0.05)；農(nóng)達導(dǎo)致120～180mg/L組細胞Nal+-K+ATP酶活性降低(P<0.05)。 4.農(nóng)達處理能誘導(dǎo)細胞DNA鏈斷裂，處理濃度在150mg/L、180mg/L，DNA受損程度嚴(yán)重；90mg/L組Cyt C和AIF表達水平高于對照組(P<0.05)；90mg/L組開始用農(nóng)達處理的L-02細胞線粒體膜電位明顯降低(P<0.05)；農(nóng)達能明顯誘導(dǎo)處理組肝L-02細胞發(fā)生凋亡和壞死(P<0.05)