誘導干細胞分化為肝系細胞的體外研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本研究旨在進一步探索ESC和骨髓MSC分化為肝細胞的體外誘導/篩選體系,并觀察其形態(tài)學變化,標記性蛋白和肝細胞功能的表達.第2章胚胎干細胞定向分化為肝系細胞的體外研究目的:研究不同分化誘導體系對ESC定向分化為肝細胞的作用.方法:小鼠ESC懸浮培養(yǎng)5-7d發(fā)育成擬胚體,在自主分化、肝細胞生長因子(HGF)誘導或5﹪大鼠淤膽血清+HGF誘導體系中分化.觀察分化細胞的形態(tài)學變化,內胚層或肝膽抗原(AFP、ALB、CK18和CK19)表達,并

2、比較不同分化細胞的糖原、白蛋白、甘油三酯及尿素氮的合成,以及細胞吲哚氰綠(ICG)和熒光二乙酯(FDA)染色情況.結論:ESC體外自主分化中止于早期內胚層.HGF誘導ESC定向分化為肝系細胞的效力有限,并促進其向中胚層分化.引入淤膽血清的誘導體系可以抑制ESC向其它胚層分化,高度定向誘導/篩選ESC分化為肝系細胞.第3章骨髓間質干細胞橫向分化為肝系細胞的體外研究目的:研究不同的體外分化誘導體系對骨髓MSC橫向分化為肝細胞的作用.方法:經

3、擴增4-6代的SD大鼠骨髓MSC分別在自主分化、HGF或5﹪大鼠淤膽血清+HGF誘導系統(tǒng)中培養(yǎng).觀察MSC在不同分化系統(tǒng)中的分化情況,檢測細胞抗原AFP、ALB、CK18和CK19表達,分化細胞的葡萄糖、蛋白質(白蛋白)、甘油三酯、尿素氮的合成功能,細胞ICG和FDA染色,安定轉化.同時檢測1-14d不同時間點淤膽血清+HGF體系誘導細胞肝特異蛋白mRNA的表達情況(RT-PCR).結論:骨髓MSC自主分化為骨髓間質細胞.HGF促進MS

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