EGFR糖基化介導GOLPH3對人腦膠質(zhì)瘤細胞增殖作用的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：研究高爾基磷酸化蛋白3(GOLPH3)對人腦膠質(zhì)瘤細胞增殖的影響，探索EGFR糖基化在其中的作用，為膠質(zhì)瘤的治療提供新的靶點。
　　方法：通過Lipofectamine2000將針對GOLPH3基因的siRNA oligo轉染到膠質(zhì)瘤U251細胞(下調(diào)GOLPH3)：(1)用反轉錄聚合酶鏈反應法(RT-PCR)及免疫印跡(western-blotting)鑒定GOLPH3的干擾效率。(2)用免疫沉淀(IP)法及l(fā)ectin-

2、blotting法檢測表皮生長因子(EGFR)的糖基化水平。(3)蛋白免疫印跡法檢測EGFR及其活性形式的蛋白表達情況。(4)RT-PCR法檢測糖基化轉移酶V(GnT-V)在核酸水平的表達情況。(5)蛋白免疫印跡法檢測EGFR下游蛋白的表達情況。
　　結果：(1)三條目的小干擾轉染48小時后，GOLPH3的mRNA及蛋白水平均顯著降低(P<0.05)，干擾效果達60％-80％。(2)下調(diào)GOLPH3后EGFR的糖基化水平明顯降低。

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