血管緊張素-（1-7）對(duì)糖尿病大鼠腎臟影響的研究.pdf

1、目的：通過(guò)觀察Ang-(1-7)對(duì)鏈脲佐菌素所致糖尿病大鼠的腎功能及各種細(xì)胞增殖指標(biāo)的影響，探討其對(duì)糖尿病大鼠腎臟的影響。 方法：65只雄性SD大鼠，單腎切除術(shù)后4周(術(shù)后存活60只)，其中47只予空腹一次性腹腔注射STZ造成糖尿病模型，剩余13只注射枸櫞酸緩沖液作為單腎切除對(duì)照組(C組n=13)。注射STZ后3天測(cè)定大鼠空腹血糖，大于13.8mmol/l者DM模型成功。成模DM大鼠(共32只)隨機(jī)分為兩組，糖尿病模型干預(yù)組予每

2、日腹腔注射Ang-(1-7)(10-6mol/l，80pmol/100g)，糖尿病模型對(duì)照組僅注射等量生理鹽水以作對(duì)照。至實(shí)驗(yàn)結(jié)束共有糖尿病干預(yù)組大鼠13例(T組n=13)，糖尿病模型對(duì)照組大鼠11例(D組n=11)。實(shí)驗(yàn)期間嚴(yán)密觀察大鼠一般狀況，成模10周后實(shí)驗(yàn)結(jié)束，取血測(cè)定血糖、血尿素氮、血肌酐，留24小時(shí)尿液測(cè)定尿尿素氮、肌酐以及24小時(shí)尿總蛋白。剖腹取出腎臟漂洗稱重后，部分腎臟組織4％甲醛固定、常規(guī)石蠟切片、HE染色、光鏡下作形

3、態(tài)學(xué)觀察。余下腎臟組織保存于液氮中，Trizol法提取其總RNA，RT-PCR法檢測(cè)腎臟組織內(nèi)PDGF、TGF-β、CⅣ的基因表達(dá)水平。應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS12.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，所有計(jì)量資料用(x±s)表示，采用t檢驗(yàn)。 結(jié)果與討論：1.大鼠一般狀況：實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，C組大鼠一般生長(zhǎng)狀況良好，體重介于360～500g，毛色光亮，活動(dòng)正常，精神狀態(tài)良好，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中無(wú)死亡。D組和T組大鼠在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)體重均明顯降低，T組大鼠狀況總體上優(yōu)于D組

4、。D組大鼠精神萎靡，活動(dòng)度差，毛發(fā)混亂，毛色枯黃，至實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)共死亡5只。T組大鼠毛發(fā)較紊亂并缺少光澤，精神稍差，活動(dòng)度降低，死亡3只。從大鼠一般狀況觀察，說(shuō)明大鼠糖尿病模型復(fù)制成功，Ang-(1-7)對(duì)糖尿病大鼠的一般生長(zhǎng)狀況有所改善。2.基礎(chǔ)指標(biāo)：(1)D組和T組大鼠血糖和尿量明顯高于C組(P＜0.01)，體重明顯低于C組(P＜0.01)，說(shuō)明并證實(shí)了DM模型的確立。(2)D、T組之間，血糖、體重、尿量無(wú)明顯區(qū)別(P＞0.05)，說(shuō)

5、明Ang-(1-7)對(duì)糖尿病大鼠的血糖以及高血糖引起的體重減少和尿量增加等癥狀無(wú)明顯影響。(3)D組和T組大鼠的腎重體重比顯著高于C組(P＜0.01)，證實(shí)了DN模型的成功。而D、T組之間腎重體重比也有明顯差異(P＜0.05)，說(shuō)明Ang-(1-7)對(duì)腎臟增生病變有抑制作用。3.血液尿液生化指標(biāo)：(1)血尿肌酐與尿素氮水平以及肌酐清除率在3個(gè)實(shí)驗(yàn)組均未見(jiàn)明顯改變(P＞0.05)，可能由于病程不夠長(zhǎng)，DM大鼠腎臟尚處于早期腎病，故尚未出現(xiàn)

6、明顯的腎功能改變。(2)尿總蛋白定量結(jié)果顯示D組和T組顯著高于C組大鼠(P＜0.05)，說(shuō)明了DN模型的成功，而在D、T組之間，兩者也有顯著性差異(P＜0.05)，進(jìn)一步證實(shí)了Ang-(1-7)對(duì)糖尿病大鼠腎臟的保護(hù)作用。4.形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果：(1)C組大鼠：腎臟橫截面腎小球形態(tài)結(jié)構(gòu)清楚，細(xì)胞間基質(zhì)少，腎小球上皮細(xì)胞無(wú)明顯腫脹，毛細(xì)血管形態(tài)正常。(2)D組：腎小球體積明顯增大，系膜細(xì)胞增多肥大，系膜區(qū)增寬，毛細(xì)血管受壓明顯，管腔塌陷。(3

7、)T組：腎小球體積增大，系膜細(xì)胞增多不明顯，腎小球毛細(xì)血管受壓，部分管腔狹窄。5.RT-PCR結(jié)果顯示：(1)T組和D組大鼠的TGF-β、PDGF、CⅣ在腎臟內(nèi)的mRNA表達(dá)水平均較C組顯著增強(qiáng)(P＜0.01)，說(shuō)明并證實(shí)了DN模型的確立。(2)T組大鼠TGF-β、PDGF、CⅣ在腎臟內(nèi)的mRNA表達(dá)水平較D組則明顯下降(P＜0.01)。結(jié)論1.本實(shí)驗(yàn)DM及DN模型復(fù)制成功。2.Ang-(1-7)干預(yù)的T組糖尿病大鼠一般狀況較D組模型對(duì)