沙眼衣原體臨床株體外藥物敏感性與耐藥機(jī)制的研究.pdf

1、目的：收集并分離泌尿生殖道沙眼衣原體感染臨床治療失敗患者的衣原體臨床株，通過研究其體外藥物敏感性和耐藥的分子生物學(xué)機(jī)制，以及與藥物臨床療效的相關(guān)性，了解本地區(qū)沙眼衣原體野生株的耐藥情況，建立脫離細(xì)胞培養(yǎng)、操作性強(qiáng)的藥物敏感性檢測(cè)方法，為沙眼衣原體感染的合理治療和衣原體感染傳播的有效控制奠定基礎(chǔ)。 方法：采集237例泌尿生殖道沙眼衣原體感染臨床治療失敗患者的尿道/宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本，其中男性190例，女性47例。標(biāo)本接種于致密單層的

2、McCoy細(xì)胞。將培養(yǎng)分離的陽性標(biāo)本傳代增殖至感染率超過90％，然后將一定濃度的衣原體接種在含有不同濃度、不同種類抗菌素(紅霉素、克拉霉素、阿奇霉素、四環(huán)素、多西環(huán)素、米諾壞素、左氧氟沙星、莫西沙星、司帕沙星、利福平)的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)48小時(shí)，碘染色觀察包涵體生長(zhǎng)的抑制情況，通過該藥對(duì)沙眼衣原體的最低抑菌濃度，確定沙眼衣原體的藥物敏感性。核酸擴(kuò)增臨床分離株的omp1基因并以AluI、MspI雙酶切進(jìn)行基因分型。同時(shí)核酸擴(kuò)增檢測(cè)沙眼衣原體

3、菌株中是否含有抗四環(huán)素基因M(tetM)；擴(kuò)增23S核蛋白體RNA、gyrA、rpoB基因后，分別通過擴(kuò)增產(chǎn)物基因測(cè)序、限制性片段多態(tài)性分析和單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析，檢測(cè)沙眼衣原體臨床株的基因突變情況。 結(jié)果：237例患者的泌尿生殖道標(biāo)本接種后，獲得82株培養(yǎng)陽性的沙眼衣原體臨床分離株，分離陽性率為34.60％。其中52株傳代后感染率超過90％，進(jìn)行體外藥敏試驗(yàn)，最終發(fā)現(xiàn)紅霉素耐藥株13株，未檢測(cè)到其他抗菌素耐藥株。將該52株臨床株

4、和4株臨床分離株進(jìn)行基因分型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)E型53株，G型2株、J型1株。完成了8株耐藥株23SrRNA擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序，結(jié)果均無A2058C突變，均有A2131T突變，其中3株有T2611C突變。69株臨床株中59株檢測(cè)tetM陽性，10株陰性。71株臨床株的gyrA擴(kuò)增產(chǎn)物Tsp509I酶切圖譜均無Ser83→IIe突變。58株臨床株rpoB擴(kuò)增產(chǎn)物的單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析未發(fā)現(xiàn)突變株。 結(jié)論：泌尿生殖道沙眼衣原體對(duì)各類抗菌素的敏感性存

5、在不同程度的降低。常用藥物的敏感性變化相對(duì)明顯，紅霉素臨床耐藥株已經(jīng)達(dá)到25％。紅霉素耐藥株僅少數(shù)有報(bào)道的T2611C突變。本研究發(fā)現(xiàn)的A2131T突變未見報(bào)道。tetM基因陽性率(85.51％)較高，表明體內(nèi)對(duì)四環(huán)素普遍敏感性降低。喹諾酮類和利福平實(shí)驗(yàn)室突變株可能在臨床株中并不常見。沙眼衣原體的耐藥機(jī)制十分復(fù)雜，仍然需要進(jìn)一步研究。E型為沙眼衣原體的優(yōu)勢(shì)基因型。以細(xì)胞培養(yǎng)為基礎(chǔ)的體外藥敏試驗(yàn)與臨床療效之間并不完全相關(guān)，因此只適于臨床不